生科第五章酶详解.pptVIP

1、氧化还原酶（oxidoreductase） 2、转移酶（transferase） 3、水解酶（hydrolase） 4、裂解酶（或裂合酶 lyase） 5、异构酶（isomerase） 6、合成酶（synthease） 亲核性基团：丝氨酸的羟基，半胱氨酸的巯基和组氨酸的咪唑基。 酸碱性基团 羧肽酶结合底物前后构象变化 羧肽酶活性中心必需基团与底物间的结合 溶菌酶-底物复合物 溶菌酶活性中心与底物结合示意图 米氏方程的推导 米氏常数的意义 不可逆抑制作用 可逆抑制作用 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 一个二肽酶对二肽Ala-Gly和二肽Leu-Gly的Km分别为2.8×10-4和3.5×10-2，哪一个二肽是酶的最适底物？该酶的两个非竞争性抑制剂的Ki值分别为5.7×10-2和2.6×10-4。哪一个是最强的抑制剂？ 固定化酶 称取25mg蛋白酶配成25mL溶液，取2mL溶液测得含蛋白氮0.2mg，另取0.1mL溶液测酶活力，结果每小时可以水解酪蛋白产生1500μg酪氨酸，假定1个每活力单位定义为每分钟产生1μg酪氨酸的酶量，请计算： 1 酶溶液的蛋白浓度及比活力； 2 每克纯酶制剂的总蛋白含量及总活力。 pH对酶作用的影响机制： 1.环境过酸、过碱使酶变性失活； 2.影响酶活性基团的解离； 3.影响底物的解离。 pH 最适 pH v 三、pH的影响作用 最适pH（optimum pH）：表现出酶最大活力的pH值。 ——凡能提高酶活力的物质都是酶的激活剂。 四、激活剂 activator 的影响作用 类 别 金属离子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Se3+ 、 Co2+、Fe2+ 阴离子： Cl-、Br- 还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 6.8 酶活性的调节 一、酶活性的调节方式 酶量调节 酶活力调节 别构调控 可逆的共价修饰调节 酶原激活 二、酶的别（变）构调控 别构调控 allosteric regulation ——当底物或底物以外的物质和别构酶分子上的相应部位非共价地结合后，通过酶分子构象的变化影响酶的催化活性，这种调节方式为~。 别构酶 allosteric enzyme ——有的酶可以与某些化合物（称为变构剂）发生非共价结合，引起酶分子构象的改变，对酶起到激活或抑制的作用，这类酶通常称为~。 别构效应物 allosteric effector ——引起别构效应的物质。 别构激活剂 别构抑制剂 三、可逆的共价修饰调节 ——是一类由其它酶对其结构进行可逆共价修饰，使其处于活性和非活性的互变状态，从而调节酶活性 。 共价调节酶（covalent regulatory enzyme） 酶蛋白的磷酸化、乙酰化、甲基化 四、酶原的激活 没有活性的酶的前体称为酶原 zymogen；proenzyme 。 酶原转变成有活性的酶的过程称为酶原的激活。 实质：酶活性部位形成和暴露的过程。 在组织细胞中，某些酶以酶原的形式存在，可保护分泌这种酶的组织细胞不被水解破坏。 赖 缬 天 天 天 天 甘 异 赖 缬 天 天 天 天 缬 组 丝 S S S S 46 183 甘 异 缬 组 丝 S S S S 肠激酶 胰蛋白酶 活性中心 胰蛋白酶原的激活过程 6.10 酶的研究方法与酶工程 酶活力——指酶加速催化某一化学反应速度的能力。 酶活力实质是测定酶促反应速度。 酶活性测定的主要指标：酶单位 酶单位（activity unit, U）——在一定条件下，单位时间内生成一定量的产物或消耗一定量的底物所需要的酶量。 一、 酶活力的测定方法 国际单位 IU ——在一定条件下，每分钟内转化1μmol底物所需的酶量。 1IU 1μmol/min 比活力（specific activity）——指每单位质量样品中的酶活力，即每mg蛋白质中所含的U数或每kg蛋白质中含的kat数。 表示 酶的纯度 酶活力单位 酶活力测定方法 1. 反应体系中加入酶液，计时; 2. 灭酶活，终止反应，并记录终了时间。 3. 测底物减少量或产物生成量。 三氯乙酸/过氯酸/加热/SDS/破坏其辅因子 光谱分析法/化学法/放射性化学法 测酶活反应条件优化 达到最适条件，所谓最适条件包括最适T、最适pH、足够大的底物浓度、适宜的离子强度及严格的反应时间，抑制剂不可有，辅因子不可缺。 二、酶的分离纯化 工业上大多采用微生物发酵的方法来获得大量酶制剂。 基本原则：避免酶变性而失去活性；防止强酸、强碱、高温和剧烈搅拌；低温操作，加入的化学试剂不使酶变性。 基本操作程序： 选材 抽提 分离 纯化 动物/植物/微生物 盐析法/有机溶剂沉淀法/超离心/超滤 机械研磨/超声波破碎/反复冻融/自溶 离