实验十四微生物对生物大分子的分解利用.docVIP

实验十四 微生物对生物大分子的分解利用 实验目的 1．通过了解不同细菌对不同的生物大分子分解利用情况，从而认识微生物代谢类型多样性。 进一步学习平板接种法及穿刺接种法微生物对生物大分子的分解利用 微生物在生长繁殖过程中，需从外界环境吸收营养物质。外界环境中的小分子有机物质可被微生物直接吸收，而大分子有机物则不能被微生物直接吸收，它们须经微生物分泌的胞外酶将其分解为小分子有机物，才能被吸收利用。例如生物大分于中的淀粉、蛋白质、脂肪等须经微生物分泌的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶分别分解为糖、肽、氨基酸、脂肪酸等之后，才能被微生物吸收而进入细胞。 不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同。只有那些能够产生并分泌跑外酶的微生物才能利用大分子有机物。 现分别介绍淀粉水解、油脂水解、明胶液化和石蕊牛乳等试验的简单原理。 淀粉水解试验 某些细菌能够分泌淀粉酶（胞外酶），将淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。淀粉被水解后遇碘不再变蓝色。 2油脂水解试验 某些细菌能够分泌脂肪酶（胞外酶），能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。所产生的脂肪酸，可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示[指示范围pH6.8（红）～pH 8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，培养基中出现红色斑点。 3明胶液化试验 明胶是一种动物蛋白。明胶培养基本身在低于20℃时凝固，高于25℃则自行液化。某些细菌能够产生蛋白酶（胞外酶），将明胶水解成小分子物质，因此培养后的培养基即使在低于20℃的温度下，明胶也不再凝固，而由原来的固体状态变为液体状态。 4石蕊乳试验 牛乳中主要含有乳糖和酪蛋白。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解利用。牛乳中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部褪色变白。 细菌对牛乳的作用有以下几种情况： （1）产酸 细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。 （2）产碱 细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。 （3）胨化 细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛乳变成清亮透明的液体。 （4）酸凝固 细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固。 （5）凝乳酶凝固 细菌产生凝乳酶，使牛乳中酪蛋白凝固，此时石蕊呈蓝色或不变色 （6）还原 细菌生长旺盛时，使培养基氧化还原电位降低．因而石蕊被还原而褪色。 器材 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气肠杆菌、粘乳产碱菌、铜绿假单胞菌。 淀粉培养基、油脂培养基、明胶液化培养基、石蕊牛乳培养基。 试管、三角瓶、培养皿、接种针、接种环等。 碘液等。 步骤 淀粉水解试验 将装有淀粉培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化，然后取出冷却至50℃左右，即倾入培养皿中，待凝固后制成平板。 翻转平板使底皿背面向上，用记号笔在其背面玻璃上划成两半，—半用于接种枯草芽孢杆菌作为阳性对照菌，另一半用于接种试验菌大肠杆菌或产气肠杆菌。接种时用接种环取少量菌在平板两边各划“十”字。 将接完种的平板倒置于37℃恒温箱中，培养24h。 观察结果时，可打开皿盖，滴加少量碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。如菌体周围出现无色透明圈，则说明淀粉已被水解。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的强弱。 油脂水解试验 将装有油脂培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化，取出并充分振荡（使油脂均匀分布），再倾入培养皿中，待凝固后制成平板。 翻转平板使底皿背面向上，用记号笔在其背面玻璃上划成两半。一半用于接种金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌，另一半用于接种实验菌大肠杆菌或产气肠杆菌。接种时用接种环取少量菌在平板两边各划线接钟。 淀粉水解试验接种示意图 油脂水解试验接种示意图 1.枯草芽孢杆菌；2.试验菌 1.金黄色葡萄球菌；2.试验菌将接种完的平板倒置于37℃恒温箱中，培养24h。 观察结果时，注意观察平板上长菌的地方，如出现红色斑点，即说明脂肪已被水解，此为阳性反应。 明胶液化试验 用穿刺接种法分别接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。 接种后置于20℃恒温箱中，培养48h。 观察结果时，注意培养基有无液化情况及液化后的形状。 石蕊牛乳试验 分别接种粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌于二支石蕊牛乳培养基中，置于37℃恒温箱中培养7d。另外保留一支不接种石蕊牛乳培养基作对照。 观察结果时，注意牛乳有无产酸、产碱、凝固或胨化等反应。注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化各现象是连续出现的，往往观察某种现象出现时，另一种现象已经消失了。现将 记录细菌对生物大分子分解利用的各项实验及其结果。 淀粉、油脂、明胶和酪蛋白等生物大分子物质能否不经分解而直接被细菌吸收？为什么？ 明胶液化试验中，为什么只能将接种后的培养基置于20℃温箱中培养？