病毒的浓缩和纯化.doc

病毒的浓缩和纯化 收集发病鹅的脾脏、肝脏和肾脏，均浆用1:5稀释 Wt/vol buffer A 10 Mm Tris-HCl ,100mM EDTA PH 7.2 离心10000 转，30分钟。再加上双抗（10000LU/ML）青霉素和链霉素 1mg/ml 。 病毒浓缩的方法用的是蔗糖梯度离心方法。 首先，10000转离心30分钟，收集上清液，用三氯三氟代乙烷纯化两次为了除去脂层。蔗糖溶液用在下一步的操作中，提前准备buffer A。上清放于30％的蔗糖的溶液中超速离心。上清重新用buffer A悬浮，放于25％－60％的不间断的蔗糖溶液中，超速离心120000转，16小时。离心完后，收集密度差别的液体。测定病毒的浮力的密度。最后，分离的液体带再用1：3 buffer A稀释，离心2小时，120000转。病毒小颗粒用悬200微升水。