考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量.doc.pptVIP

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。 蛋白质与考马斯亮蓝G250的结合十分迅速，约2min即可反应完全，其复合物在1h内保持稳定。 考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。 【器材与试剂】 （一）器材 1. 可见光分光光度计 2. 刻度移液管 3. 移液枪 （二）试剂 1. NaCl （0.15mol/L） 2. 考马斯亮蓝试剂 3. 蛋白质标准液 （1mg /mL） 4. 待测蛋白质溶液 1.如黑板上表格操作 2.绘制标准曲线：以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 3.算出待测蛋白质浓度？ 分光光度计的分类 分光光度计的基本结构 无论哪一类分光光度计都包括：光源、单色器、吸收池、检测器和测量仪表。分光光度计各部件的次序如图所示: 思考题 1.蛋白质的测定方法有几种？比较各种方法的优缺点。 2.在考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度时，当蛋白质浓度偏高时，为什么曲线会适当下斜? * * 考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质含量 【实验目的】 1.