微波辅助中空纤维液相微萃取液相色谱串联质谱法同时快速测定牛奶中27种抗生素残留.docVIP

微波辅助中空纤维液相微萃取液相色谱串联质谱法同时快速测定牛奶中27种抗生素残留 　　1引言 　　近年来，由不当使用或滥用药物导致牛奶中的抗生素残留超标引起的乳制品安全问题屡有报道[1，2]。抗生素残留不仅会影响乳品质量[3，4]，且长期食用将造成消费者的过敏反应、产生耐药性菌株等多种危害[5]。我国乳制品质量和安全已成为广大消费者关注的热点问题。研发多种（多类）抗生素残留同时、快速、高灵敏分析方法，对提升乳制品中药物残留的检测水平和监管力度有重大意义。 　　常用抗生素残留检测方法主要有微生物法、荧光法、气相色谱法、高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法（LCMS/MS）等[6-9]。其中，LCMS/MS的灵敏度高、选择性好，且无需衍生化，是多残留分析最有力的手段之一。已有同时检测鱼肉、蜂蜜、牛奶中磺胺、大环内酯、四环素、喹诺酮等多种类药物残留等研究报道[10-12]。由于药物理化性质的差异性，样品前处理方法需适用于较宽范围的化合物，例如直接稀释样品或以复合型的固相萃取柱（Solid phase extraction， SPE）净化和富集。前者未除去杂质、基质干扰较大、影响灵敏度；后者不仅耗时、耗溶剂，且需要预实验选择合适的SPE柱。 　　中空纤维液相微萃取（HFLPME）是一种利用中空纤维的微孔限制大分子不能进入萃取相，从而减少基质干扰的微萃取技术。目前，HFLPME已在环境[13，14]、生物[15，16]样品痕量物质分析中有良好的应用。然而，已有的HFLPME技术中待分析组分主要依靠被动扩散方式进入萃取相，导致传质速率低，平衡时间长，且分析物无法快速从样品基体中游离出来，萃取过程常耗费数小时[14，16]。 　　本研究将微波辅助萃取（Microwave extraction， MAE）技术与HFLPME技术相结合[17]，利用微波对微观粒子瞬时极化所带来的大量热能和快速传质，达到缩短HFLPME平衡时间、提高萃取效率的目的。实验比较了MAE和普通HFLPME的萃取性能差异，考察了各个影响因素对萃取效果影响。微波辅助HFLPME不仅将萃取时间缩短至普通HFLPME的1/5，而且能大幅提高了药物的富集效果，对于牛奶样品而言仅需沉淀蛋白质即可直接萃取。适用于同时分析牛奶中喹诺酮、磺胺、大环内酯等27种抗生素残留，方法简便、快速且环保。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　API5000型四级杆串联质谱仪配电喷雾离子源（美国AB公司）； Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Agilent Eclipse Poroshell C18色谱柱（150 mm × 2.1 mm i.d.，2.7 　　SymbolmA@ m，美国Agilent公司）；漩涡振荡混合器（美国Thermo公司）；冷冻离心机（最大转速14000 r/min，美国Sigma公司）； FR300L型手压封口机（温州市鹿城焊接厂）；901型磁力搅拌器（上海司乐仪器公司）；MR HeiTec型磁力搅拌器（Heidolph Instruments公司）；美的微波炉（EG823MF7NRHJDXX，最大输出功率800 W）； Gilson移液器（可调范围：10-100 μL， 20-200 μL， 10-1000 μL， 1000-5000 μL，法国Gilson公司），聚偏氟乙烯中空纤维（内径1.2 mm，壁厚200 μm，孔径0.2 μm，天津工业大学）。 　　西诺沙星、环丙沙星、依诺沙星、氟罗沙星、洛美沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲基异恶唑标准物质（纯度95% 　　Symbol-A@ 99%，美国Sigma Aldrich 公司）；麻保沙星、培氟沙星、磺胺嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲恶唑、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺二甲异嘧啶、磺胺二甲异恶唑、甲氧苄氨嘧啶、克林霉素、林可霉素、竹桃霉素（纯度95% 　　2.2标准溶液的配制 　　准确称取各标准物质于烧杯中，加入少量甲醇或乙腈，待完全溶解后转移到100 mL棕色容量瓶，并用溶剂定容，配制成500.0 mg/L单标储备液。按药物分类，移取各个单标储备液制备成10.0 mg/L 分组混合标准溶液。储备液均置于 　　Symbolm@@ 30 ℃避光保存。移取各分组混标溶液配制成浓度为1.0 mg/L 的混合标准工作液，并按需要逐级稀释，现配现用。 　　2.3色谱质谱条件 　　质谱条件如下： 正离子模式（ESI+）下喷雾电压为5500 V，雾化气压力276 kPa（GS1，40 psi），去溶剂气压力483 kPa（GS2，70 psi），气帘气压力为241.5 kPa （CUR