培训课件_钙磷镁,微量元素检验.ppt

钙指示剂除钙红外，还有依地铬黑T（红→蓝），钙黄绿素（黄→绿），紫红酸铵（红→紫）。钙红指示剂终点明显，不受血清镁干扰，镁在强碱性条件下生成Mg（OH）2↓，指示剂在强碱性条件下不稳定，加指示剂后应立即滴定。 操作简便，无需特殊仪器设备，适合于基层医院，但终点判断人为误差较大，溶血、黄疸影响终点判断。 2.邻甲酚酞络合酮法（O-CPC） 邻甲酚酞络合酮是一种金属络合染料，也是一种酸碱指示剂，在碱性溶液中能与钙和镁螯合，生成紫红色螯合物（吸收峰575nm），作钙测定时，加入8-羟基喹啉消除镁的干扰。 Mg2+ ＋ 8-羟基喹啉 可溶性络合物 Ca2+ ＋ 邻甲酚酞络合酮 紫红色螯合物 灵敏度很高，方法简便、快速、稳定，同时适于手工检测和自动化分析仪。试管、器皿如有微量的钙污染亦会引起误差，最好使用一次性试管，所有试剂置塑料瓶中保存。 3.甲基麝香草酚蓝法（MTB） 血清钙在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝（MTB）结合，生成一种蓝色络合物，加入8-羟基喹啉消除镁干扰。 显色稳定，线性范围大，溶血、黄疸无干扰。 4.离子选择电极法（ISE） 此法迅速、简便、灵敏度高、重复性好，并可同时测定总钙和离子钙，离子钙测定最好用血清，不用抗凝剂，在急需检测结果时可用肝素抗凝。 【正常参考值】 成人总钙2.25～2.75mmol/L 离子钙1.15～1.42mmol/L 磷钼酸还原法 我国推荐的常规方法 非还原法 染料结合法 紫外分光光度法 黄嘌呤氧化酶比色测定法 WHO推荐的常规方法 CV—多元络合超微量测定法 同位素稀释质谱法 决定性方法 原子吸收分光光度法等　 二、血清磷测定 在强酸条件下，无机磷酸盐与钼酸盐反应，形成非还原性磷钼酸复合物。在340/480nm的吸光度与标本中无机磷的浓度成正比。 1.磷钼酸法 以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成钼蓝。 （NH4）6Mo7O24 ＋ 3H2SO4 ＋ 4H2O 7H2MoO4＋3（NH4）2SO4 12H2MoO4 ＋ H3PO4 12MoO3·H3PO4 ＋ 12H2O 12MoO3·H3PO4 ＋ 还原剂 钼蓝 还原剂有很多种，1-氨基-2-萘酚-4-磺酸，应用历史较久，试剂不太稳定，显色时间长，灵敏度不高。氯化亚锡，灵敏度较高，颜色强度随显色时间时间而改变，偏离Beer定律。硫酸亚铁，显色较稳定。 2.孔雀绿直接显色法 血清经浓尿素溶液稀释后，用孔雀绿-钼酸试剂显色，加入吐温-20使标准液与血清标本显色反应速度接近。 灵敏度较高，但影响因素多，重复性差，显色不稳定。 3.酶法① Gn ＋ H3PO4 Gn－1 ＋ G-1-P G-1-P G-6-P G-6-P ＋ NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸 ＋ NADPH ② 次黄苷 ＋ H3PO4 次黄嘌呤 ＋ R-1-P 次黄嘌呤 ＋ H2O ＋ O2 尿酸 ＋ H2O2 H2O2 ＋N-乙基-N-（3-甲基苯基）-N-乙酰乙胺 紫红色复合物 发色底物 555nm 糖原磷酸化酶 葡萄糖磷酸变位酶? 6-磷酸葡萄糖脱氢酶? 嘌呤核苷磷酸化酶 黄嘌呤氧化酶? POD? 比色法 我国推荐MTB法钙镁试剂法作为常规方法　 荧光法 离子层析法 离子选择性电极法(ISE) 酶法 原子吸收分光光度法(AAS) 参考方法 同位素稀释质谱法(ID-MS)等 决定性方法 三、血清镁测定 1.钙镁试