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5. 应用 (1)氨基酸分离 薄层:硅胶G板; 流动相: 正丁醇:醋酸:水=3:1:1 Rf值:丙氨酸0.27, 氨基辛酸0.60, 精氨酸盐酸盐0.08, 磺基丙氨酸0.14, 胱氨酸盐酸盐0.16, 二羟基苯丙氨酸0.45, 甘氨酸0.22, 组氨酸盐酸盐0.06, 羟脯氨酸0.20, 亮氨酸0.47, 甲硫氨酸0.40, 颉氨酸0.36, 苯丙氨酸0.49, 脯氨酸0.19, 肌氨酸0.17, 苏氨酸0.25, 色氨酸0.56 (2)核苷,核苷酸, 寡核苷酸的分离 薄层:硅胶F254 流动相: 正丁醇:HAc:H2O = 5:2:3 Rf值:腺苷-5`-磷酸0.35, 胞苷-5`-磷酸0.24, 脱氧腺苷-5`-磷酸三氯乙酯0.74, 脱氧胸苷酰(3`,5`)脱氧胸腺嘧啶核苷0.61, 5-甲基尿苷-5`-磷酸酯(胸苷-5`-磷酸)0.37, 5`-0-磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰-(3`5`)脱氧胸腺苷酰-(3,5)脱氧胸苷0.19, 5`-0-三氯乙基-磷酸脱氧腺苷酰(3`,5)脱氧腺苷0.68, 尿苷-5`-磷酸0.30 (3)类固醇、固醇的分离 薄层:Al2O3 流动相:C6H6:乙酸乙酯=4:1 Rf值: 胆甾醇0.83, 别色胆甾醇0.77, ?-谷甾醇0.63, 豆甾醇0.62, ? -谷甾烷醇0.44 (4)碱金属的分离 薄层: 硅胶卷 流动相:含0.1mol/L I2 的硝基甲烷: C6H6 = 40:60 Rf值:Cs+0.55, Rb+ 0.47, K+ 0.36, NH4+ 0.24, Na+ 0.18, Li+ 0.06 在薄层色谱和纸色谱中,Rf 定义为__________, 两物质的Rf相差____, 就可能彼此分离。 原点至层析点中心的距离 ━━━━━━━━━━━━ , 0.02 原点至溶剂前沿的距离 ●对不同的组分有不同的吸附量,因而能较好的把试样中各组分分离。 ●在所有的溶剂和洗脱剂中不溶解。 (1)氧化铝 层析用的商品氧化铝根据制备的酸度不同可分为如下三种类型: a 酸性氧化铝:pH=3.5~4.5,适用于分离酸性化 合物,如某些酸性色素、二羧酸氨基酸、酸性多肽 以及对酸性稳定的中性物质。 b 中性氧化铝:pH=6.9~7.1,应用较广泛,适用 分离生物碱、挥发油、萜类、甾体、蒽醌以及在酸 碱中不稳定的酯、内酯等化合物。可用于分离酸 性或碱性氧化铝分离的物质. C 碱性氧化铝:pH=9~10,酸性较强的化合物在碱性氧化铝上吸附的很牢(所以,酸性物质分离不好),故通常用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。 一般薄板要求把氧化铝活化成Ⅱ ~ Ⅲ级使用. 氧化铝的活性与含水量密切相关(含一定量的水份时,吸附剂表面的吸附中心会被水分子占据) 活性 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 含水量(%) 0 3 6 10 15 故加热驱除水-活化;加入一定量的水-失活 Δ 100 ~ 150oC, 除去Al2O3中与羟基结合的部分水份,使Al2O3有一定的活性 Δ150 ~ 300oC, Al2O3活性达Ⅱ~ Ⅲ级 Δ300 ~ 400oC,Al2O3活性达Ⅰ ~ Ⅱ 级 Δ 600oC, Al2O3进一步脱水并开始烧结 由于脱水过程受到许多因素的影响,因此,每批生产的Al2O3 ,其表面积和表面孔穴结构并不一致,活性也不相同。 Al2O3活性的测定:取20 μL染料溶液(偶氮苯30 mg、对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、和对氨基偶氮苯各20 mg ,溶解于50 mL CCl4中),加到薄板上,用CCl4展层,根据下表确定活性。 活性 Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Rf,偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95 Rf,对-甲氧基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89 Rf,苏丹黄 0.01 0.25 0.57 0.78 Rf,苏丹红 0.00 0.10 0.33 0.56 Rf,偶氮苯 0.00 0.03 0.08 0.19 市售的供薄层色谱用的Al2O3有: Al2O3 -H 氧化铝中无粘合剂 Al2O3 -G 氧化铝中含煅石膏(一般5%煅石膏)[煅石膏CaSO4,作为粘合剂] Al2O3 -HF254 氧化铝中
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