第二代测序技术学案.ppt

2.4 RNA 测序 根据三代测序技术实时测序的特点，可以直接对RNA 进行测序，做到了对特定组织和细胞内的表达差异的精确定位。运用Helicos 操作平台对酵母的聚腺苷酸化的转录本进行精确定量，用50 个通道中的6个通道，共产生2． 4 亿个Reads。利用Helicos 遗传分析平台可以将DNA 聚合酶换成反转录酶对RNA 直接测序，主要通过Poly( dT) 包被的表面捕获聚腺苷酸化的RNA，成功完成对酿酒酵母RNA 的直接测序，免除将RNA 转变成cDNA 的过程。同时借助PacBio 技术平台，也可完成对RNA 的直接测序，Uemura 等就利用该技术进行实时测序观察核糖体中mRNA 的翻译过程。单分子测序技术最大的优势，也是最直接的应用就是检测细胞和组织内基因表达水平，同时对基因的结构做出分析，如RNA 的剪接，是否有碱基突变或异常表达基因等。而且还能检测到微量的基因表达子或罕见的非编码RNA。PacBio RS 还可对连续的A 或者T 区域测序，因为PolyA 长度和RNA 的半衰期有关，所以对长PolyA 的研究对RNA 的代谢有重要意义。 2． 5 重复序列和poly 结构的测序 在所有人的X 染色体上都有一段CGG 三核苷酸重复序列，正常人的CGG 重复次数为5-44 次。过长的重复次数会对FRM1 基因转录或翻译出FRM1 蛋白