HPLC测定蛋白质含量方法验证资料.ppt

精益生产 智能管理 ———HPLC测定蛋白质含量方法确认 发言人：程红波 日期：2016-3-15 方法确认（HPLC法） 目的：证明HPLC方法适合于重组人粒细胞 刺激因子蛋白质含量检测要求 依据：《中国药典》2015年版 洗脱梯度（2015年版中国药典） 按下表进行梯度洗脱 编号 时间/分 A/% B/% 1 0 60 40 2 40 20 80 3 45 0 100 4 50 60 40 5 60 60 40 A：0.1%三氟乙酸的水溶液 B： 0.1%三氟乙酸的乙腈溶液 含量计算公式 供试品蛋白质含量（ug/ml)= CR×AX×nX AR×nR 式中 CR为复溶所得标准品溶液的蛋白质含量， ug/ml； AR为标准品溶液的平均峰面积； AX为供试品溶液的平均峰面积； nR为标准品溶液的稀释倍数； nX为供试品溶液的倍数； 方法比较（ lowry与HPLC） Folin-酚（lowry） HPLC 要求人为精确控制操作时间 设备控制时间，减少人为误差 操作复杂，干扰因素较多 操作简便，干扰因素较少 重复性、精密度较差 重复性、精密度较好 只适用于检测原液的蛋白质含量 适用于原液及成品的蛋白质含量 / 2015年版《中国药典》首次规定的检测方法 方法比较（lowr