转基因食品安全分析-课程-第二部分-转基因食品生物技术详解.ppt

蓝白斑筛选的原理 　蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。 蓝白斑筛选的原理 这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。 新生儿溶血症 * * * * * * 苏云金杆菌 毒蛋白基因 质粒载体 重组质粒构建 农杆菌 棉花 棉花细胞 侵染转移 转基因棉花 抗虫棉的构建 GM Food –生物技术 植物转基因的受体系统 ◆ 组织受体系统（如：受伤的细胞容易受到病毒或质粒的感染，并形成愈伤组织，可诱导分化出完整植株） ◆ 原生质体系统（便于体外细胞和遗传操作） ◆ 生殖细胞受体系统（1、单倍体培养诱导愈伤组织、转化；2、利用花粉和卵细胞的受精过程转化：类似转基因动物？） ◆ 叶绿体转化系统（能直接表达原核基因） GM Food –生物技术 外源基因导入植物受体的方法 ◆ 直接转化法 ◆ 农杆菌介导转化法（1974年） ◆ 基因枪法（1987年） ◆ 植物病毒介导法 GM Food –生物技术 转基因植物的类型 GM Food –生物技术 三、转基因植物的生产实践 抗除草剂的转基因植物（最早进入田间生产，目前栽培面积最大）如 Monsanto 的抗除草剂草甘膦大豆 抗虫转基因植物 如 Syngenta的Bt 176抗虫玉米 抗病转基因植物 （抗病毒，抗真菌，抗细菌） 抗环境胁迫转基因作物 （温度、水分、化学物） 植物发育调节基因工程 （控制果实成熟，雄性不育，改良植物品质） 医药领域中的转基因植物（利用植物作为生物反应器，生产药用蛋白、食用疫苗等） 转基因水稻与小麦 GM Food –生物技术 * 金大米 GM Food –生物技术 通过转基因技术将胡萝卜素转化酶系统转入到大米胚乳中可获得外表为金黄色的转基因大米，被称为“黄金大米”，英文为Golden Rice。 转SCK基因水稻与对照 GM Food –生物技术 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck) 彩色玉米 抗虫的Bt转基因玉米 GM Food –生物技术 * 转基因大豆 GM Food –生物技术 抗巨细胞病毒CMV病毒转基因番茄 抗CMV病毒转基因甜椒 抗除草剂大豆 GM Food –生物技术 脂肪含量高 含β-胡萝卜素 转基因向日葵 GM Food –生物技术 * GM Food –生物技术 转基因棉花 也许有一天…… GM Food –生物技术 GM Food –生物技术 第三节 转基因动物 一、转基因动物的发展 转基因动物 将外源基因导入动物细胞，经发育途径，获得能够表达外源基因的动物。 世界第一只转基因动物 世界首只转基因灵长类动物 ——-安迪 目的基因 显微注射?已交配的 取出 移植 受体动物 妊娠供体动物 受精卵 输卵管 转基因动物 缺点：注入目的基因的命中率低，目的基因的整合率低，受精卵移植的受孕率低。 动物转基因的经典技术路线 GM Food –生物技术 二、动物转基因的技术 转基因动物 受体动物子宫  目的基因