19蛋白质研究技术2.pptVIP

* 1.5 电泳 A SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） 使用含有十二烷基硫酸钠（ SDS）和还原剂（通常为巯基乙醇）的样品处理液对蛋白质样品进行处理（一般煮沸3～5分钟），通过加热和SDS可以使蛋白质变性，多亚基的蛋白质也将解离为单亚基。同时还原剂可以切断蛋白质中的二硫键（使二硫键还原）。 经过这样处理的样品中的肽链都是处于无二硫键连接的，分离的状态。由于SDS是带有负电荷的分子，同时它有一个长的疏水尾巴，SDS通过疏水尾巴与肽链中的氨基酸的疏水侧链结合，结合SDS的比率大约是一个蛋白质分子中每两个氨基酸残基结合一分子的SDS。 垂直板电泳装置 加样 样品迁移方向 电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。 混合样品 带孔胶 按分子大小分离 电泳方向 电泳 小分子 大分子 夹在两块玻璃板之间的凝胶 电泳缓冲液 电泳缓冲液 加在槽中的经SDS处理的样品 分子量小 分子量大 电源 电泳后的凝胶径考马斯亮篮染色、脱色后的凝胶照片 标准蛋白分子量 未知蛋白 在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽链分子量。 相对迁移率 水平式电泳装置 电泳缓冲液 凝胶 B 等电聚焦电泳（ IFE） 利用聚