10.冻存与复苏、细胞计数.pptVIP

细胞冻存与复苏技术 细胞计数 许重洁 xcj029@163.com 细胞工程教研室 细胞冻存及复苏 实验目的 实验原理 实验方法 注意事项 作业与思考 一、实验目的 1 .掌握细胞冻存与复苏的原理。 2.掌握细胞计数的一般方法。 3 .熟悉体外培养细胞液氮冻存技术及冻存细胞的复苏技术。 二、实验原理 冻存与复苏  实验原理 冻存与复苏中的损伤 直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、脱水、蛋白变性等，能引起细胞死亡。 1.冰晶的损伤 2.溶质的损伤 （一）冷冻保护液 如向培养液加入保护剂 1.可使冰点降低。 2.在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。 3. 贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。可以保护一些重要的蛋白质和细胞器的功能。 ?? 目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油。它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。 （二）慢冻和快复 1.慢冻：在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。 2.快复：细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－50～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。 在低温下