第四章 RNA基因表达RNA转录.ppt

第四章 RNA转录 3、-35区（Sextama Box或R位点） poly（A）的功能 ① 提高mRNA在细胞质中的稳定性。 ② 协助mRNA从细胞核向细胞质转运。 ③作为核糖体的识别信号，使mRNA分子有效翻译。 ④ 对基因的表达调控有重要作用。 （三）mRNA的内部甲基化 真核生物mRNA分子中有许多甲基化的碱基； 具体的甲基化位点还不太清楚； 主要是：N6-甲基腺嘌呤（m6A）； 推测可能为mRNA的剪切提供信号。 （四）核mRNA前体的剪接（Splicing） 真核不连续基因的初级转录产物中，外显子与内含子交替出现----割裂基因（Split gene）； 转录后把内含子切除而把外显子连接起来产生成熟RNA分子的过程，叫RNA剪接（RNA splicing）。 内含子在真核基因中所占的比例很高，甚至超过99%。 1、核mRNA内含子剪接位点特征 内含子总是由GU开始，以AG结束，其规律称为GU-AG法则（GU-AG rule) 或Chambon法则。 5′端剪接位点(供位)相邻的保守序列：5′-AG↓GUPuAGU-3′ 3′端剪接位点(纳位)相邻的保守序列：5′-(Py)nNCAG-3′ 分枝点保守序列：Py80NPy87Pu75APy95，其中A为百分之百保守，且具有2′-OH。 mRNA前体正确剪接所必需的 2、参与核mRNA前体剪接的主要物质 snRNA (small nuclear RNAs，核内小分子RNA） snRNP SnRNA一般≤300碱基，包括U1—U6等； 在自然状态下， snRNAs与特异的蛋白质形成复合 物-SnRNP 在剪接过程中有5种snRNAs 参加，它们是U1、U2、 U4、U5、和U6； mRNA前体与snRNP形成复合物----剪接体； mRNA前体的剪接通过剪接体进行 各种SnRNP功能表 U1 snRNA自我配对形成了多个茎环结构，从而构成了不同的功能区。Sm结合位点是和其他snRNP相互作用的区域。 其5’端有一保守序列：3′-CAUUCAU-5′。 这一序列可与核mRNA内含子5′端的边界序列互补结合，这对于剪接反应是很重要的。 U2与分枝点配对 U6与mRNA 5′端配对 U6 snRNA既能与U4配对也能与U2配对 3、剪接机制（简化） 第一次转酯－－左外显子、内含子剪切套索 第二次转酯－－外显子连接、套索状内含子释放 剪接体解体与套索降解同步 4、具体的剪接机制 U1和U2作用使内含子的 5′端和 3′端带到一起 U1通过与 5′剪接点互补而结合 U2识别并结合分支点A U1、U2、mRNA与 U4－U5－U6复合物形成一个完整的剪接体 U1、U4脱离，通过两次转酯反应完成内含子剪切 一、转录的起始过程 1、RNA聚合酶Ⅰ介导的转录起始 RNA Pol I 启动子的转录因子（哺乳动物） TAFs RNA聚合酶Ⅰ 介导的转录起始 2、RNA聚合酶Ⅱ介导的转录起始 RNA聚合酶Ⅱ 介导的转录起始 TFⅡD: TBP亚基识别TATA。 TFⅡA:稳定TFⅡD和DNA的结合 TFⅡB: 结合模板链 (-10~+10)，起始PolⅡ结合，和TFⅡE/F相互作用。 TFⅡF + RNAPolⅡ: TFⅡF小亚基与PolⅡ结合，大亚基具解旋酶活性 TFⅡE:结合在PolⅡ的前部，使复合体的保护区延伸到下游 。 此后，TFⅡH、TFⅡJ等因子依次加入。 3、RNA聚合酶Ⅲ介导的转录起始 RNA pol Ⅲ 启动子的转录因子的结构和功能 2、转录的延伸 在多种转录因子的共同作用下来延伸新链。 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。 RNA-Pol RNA-Pol RNA-Pol 核小体 转录延长中的核小体移位 转录方向 3、转录的终止 1、RNA聚合酶Ⅰ 转录出rRNA前体3′末端后， 继续向下游转录，遇到一个18bp的终止序列。 2、RNA聚合酶Ⅲ 转录模板的下游存在一个 终止子，是位于GC丰富序列之中的TTTT。 3、RNA聚合酶Ⅱ的转录没有明确的终止信号。 原核生物与真核生物转录的区别 原核生物 真核生物 RNA pol 一种 高度分工 起始转录因子 没有 需要（各不同