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第三章 核磁共振波谱学 Nuclear magnetic resonance spectroscopy, (NMR) 3.1 简介 除X射线衍射以外，NMR技术是目前最普遍用于测定生物大分子空间结构的技术。 NMR波谱学测定结构的方法比X射线晶体学方法年轻了20年。 1982年，确立了同核二维NMR谱测定蛋白质溶液构象的标准方法。 这一方法目前仍是一个发展的领域。 NMR落后于X射线晶体学的方面： 目前NMR还只能测定小的和中等大小的蛋白质的结构。 NMR测定的最大结构：30-40kD （270-360氨基酸） X射线晶体学测定的最大结构：2500kD 60倍大于前者（见图） NMR谱图的识别要手工完成，耗时且易出错。目前还没有自动化的谱图识别方法。 X射线晶体学和NMR波谱学测定的最大结构的比较 NMR相对于晶体学的优点： NMR使用溶液样品，因此，它不局限于那些能很好结晶的样品。 NMR可以测定不同溶液条件下的分子结构。 NMR也使得研究分子的性质相当容易，例如，研究分子的柔性、分子与其它分子的反应或相互作用、分子的动态特征等。 NMR技术的原理简述 NMR技术依赖于一个外加磁场和某些原子核中的天然“小磁铁”之间的相互作用。 用NMR技术解析一个蛋白质的结构就象一件出色的侦探工作。 NMR使用的磁场 大多数强度范围在500mHz(11.7tesla)-800mHz(18.8tesla)之间。 NMR磁体是超导磁体 Vrian公司的NMR波谱仪（见图） 强度为900mHz的Vrian公司的NMR波谱仪 NMR波谱仪 连续波谱仪：60-70年代产品 结构示意图（见图） 射频振荡器 磁场系统 探测系统 记录装置 灵敏度低，已基本淘汰。 脉冲傅里叶核磁谱仪：目前流行 结构示意图 3.2 NMR的基本原理 3.2.1 原子核的自旋与核磁共振 原子核的自旋量子数I I与原子核的质量数和原子序数有关 核自旋量子数I与质量数和原子序数的关系 I=0的原子核，如12C, 16O, 32S等，没有自旋，不产生核磁共振现象。 I≠0的原子核，具有自旋，可产生核磁共振现象。 结构生物学中，经常研究的原子核有：1H, 13C, 15N, 31P, 它们的自旋量子数I=1/2。其中，1H核在生物分子中广泛存在，13C, 15N是稀有同位素。 原子核的自旋与进动 原子核都具有电荷和质量，自旋量子数I≠0的原子核由于能够自旋因而还具有自旋动量或角动量。旋转的电荷有磁场，有自旋的核就有与角动量有关的磁矩。 在一个强大而均匀的外加磁场H0中，自旋核的磁矩将沿外磁场的方向进行取向。自旋核将产生进动。（见图） 核磁共振的产生 原子核自旋轴在外加磁场H0中的取向是量子化的，每一个取向相当于一个自旋能级。 H0的增加不能产生自旋能级的跃迁。 在与H0相垂直的方向上再施加一个比H0弱很多的附加磁场H1（称为射频场），当H1的频率与原子核的进动频率相同时，原子核从附加磁场（射频场）吸收能量，产生自旋能级的跃迁。这就是核磁共振（见图）。 核磁共振条件的理论推导 在外加静磁场H0的作用下，核自旋量子数不为零的原子核会发生能级分裂。 以1H为例，其I=1/2，在静磁场H0中，它的进动可以有2I+1=2个方向，即有2个能级，分别为顺磁场和逆磁场两种取向。如图所示。 b DE H0=0 a H00 能级裂分图 顺磁场的1H核居较低能态，逆磁场的1H核居较高能态，二者能级差： DE = g h H0 其中，g 为旋磁比，是各种核的特征常数，不同原子核的旋磁比不同。h = h/2p， h 为普朗克常数。H0为外加静磁场的强度。 　 自旋核绕外磁场方向进动的频率为： n0 = gH0/2p 以上两个方程合起来得： hn0=g (h/2p) H0=DE 当外加一个与静磁场H0垂直的射频电磁场 H1，使其频率满足：