蛋白质的稳定性与稳定化1.pptVIP

3．盐键 又称离子键，本质是相反电荷间的静电相互作用。盐键对蛋白质稳定性的作用很显著。 生理条件下，蛋白质中的碱性氨基酸和酸性氨基酸分别解离形成正的和负的离子。多数情况下这些基团都分布在球状蛋白质分子的表面，而与介质水分子发生电荷—偶极之间的相互作用，形成排列有序的水化层； 荷电的侧链也在蛋白质分子内部出现，它们一般与其他基团形成强的氢键。但是偶尔也有少数带相反电荷的侧链在分子的疏水内部形成盐键。 4．氢键 5．二硫键 并不参与指导蛋白质分子的折叠，但一旦形成即可对 蛋白构象起稳定作用。 6．对氧化修饰敏感的氨基酸含量降低 Cys的巯基和Trp的吲哚基对氧化修饰特别敏感。 7．氨基酸残基的坚实装配 8．疏水相互作用 ①形成的驱动因素 a.蛋白质分子中的疏水基团或疏水侧链出自避开水的 需要而被迫相互接近。当疏水基团接近到等于范德 华距离时，相互间将有弱的范德华引力； b.蛋白质溶液的熵增 当疏水化合物或基团进入到水中时，它周围的水分子 将排列成刚性的结构，即所谓笼形结构。使得熵值减 小。但是，由于疏水相互作用，排列有序的笼形结构 将被破坏，水分子被排入自由水中，这样水的混乱度 增加，即熵增加。因此疏水相互作用是熵驱动的自发 过程。 ②在生理温度范围内随温度升高而加强。但超过一定 温度（50～60℃，因侧链而异）后，又要减弱。 二．测定蛋白质稳定性的方法 （一）蛋白质的变性过程：两步过程 酶的两阶段不可逆失活 酶分子的可逆伸展（不可逆失活的初始阶段） 黑体部分—酶的活性中心 （二）表征蛋白质稳定性的特征参数 3．变性作用决定因素 ①去垢剂本身的结构 本身的分子大小 结构是否具有柔性 ②CMC（临界胶束浓度：去垢剂与膜蛋白结合形成微胶粒时去垢剂的最低浓度 ）越小，越易使蛋白质变性。 六、变性剂 1．脲和盐酸胍 目前还没有普遍接受的机理。但认为可能会有以下 两种方式： ①消除了在维持蛋白质的三级结构中起重要作用的疏 水相互作用； ②直接与蛋白质分子作用。 2．螯合剂 使金属酶失活但却能稳定不需要金属离子的酶。 3．有机溶剂 ①与蛋白质争夺水膜，导致蛋白质构象改变； ②降低溶液的介电常数，维持蛋白质天然构象的非共价 力的平衡被打破，使其构象改变； ③破坏了稳定蛋白质空间结构的作用力而使得蛋白质分 子伸展。 破坏氢健→空间结构改变→疏水基团暴露 七、重金属离子 1．与蛋白质的巯基反应，将其转变为硫醇盐，如Hg2+, Cd2+, Pb2+； 2．水解二硫键，如Ag+, Hg2+. 八、巯基试剂：还原二硫键。 九、热 1．构象变化的热失活过程： 两步过程：酶可逆热伸展使它的反应基团和疏水区 域暴露，而后，由于疏水基团在溶剂中的暴露引起 蛋白质的聚合；或者，由于单分子扰动，也能引起 酶失活。以该方式引起的失活作用当恢复常规条件 时，在被扰动的酶分子结构中可形成非天然的非共 价相互作用； 2．高温还能直接引起蛋白质一级结构的破坏，如天冬酰 胺和谷氨酰胺的脱氨作用、在天冬氨酸处的肽键水 解、半胱氨酸的氧化、二硫交换作用和二硫键的破 坏，上述这些破坏性反应直接导致高温下的酶失活。 十、机械力 1．振动：增加气—液界面的面积。酶分子在这个界面上 呈线性排列并伸展，以使疏水残基最大限度地暴露于 空气，然后，蛋白质由于疏水区域的暴露而失活； 2．剪切：当蛋白质溶液快速通过管道或膜时，在管壁或 膜壁处，或者在靠近管壁或膜壁处产生剪切力梯度。 这个梯度能引起蛋白质构象变化，导致原先埋藏的疏 水区域暴露，然后聚合。 3．超声波：超声波压力使溶解的气体产生小气泡，小 气泡迅速膨胀至一定程度时突然破碎，这就是空化 作用。它既产生机械力，又产生化学变性剂（如在 小气泡中热反应所产生的自由基），结果使蛋白质 失活； 4．压力：10～600 MPa的压力下可使酶失活。压力诱 导的失活通常认为是蛋白质变性后聚合的结果。此 外，还发现多亚基酶在高压下可解离成单体，压力 下半胱氨酸发生氧化，也会引起蛋白质失活。 十一、冷冻和脱水 1．冷冻 ①低温减弱了疏水相互作用，引起蛋白质的解离和变 性。这种变性是可逆的，且与