泥鳅遗传毒理综合实验.doc

摘 要：以泥鳅为试材，采用微核测试法研究不同浓度丙酮 (0～10．0ml／L)对泥鳅红细胞徽核率的影响，结果表明：泥鳅红细胞微核率随丙酮浓度的增加而增加。检验表明，泥鳅红细胞微核率与对照的差异达显著或极显著水平，即丙酮对泥鳅的红细胞造成显著的染色体损伤。 关键词：丙酮；泥鳅；微核； 前言： 丙酮在工业上主要作为溶剂用于炸药、塑料、橡胶、纤维、制革、油脂、喷漆等行业中，也可作为合成烯酮、醋酐、碘仿、聚异戊二烯橡胶、甲基丙烯酸、甲酯、氯仿、环氧树脂等物质的重要原料。在精密铜管制造行业中，丙酮经常被用于擦拭铜管上面的黑色墨水。同时丙酮又是很多农药的有效成分。但丙酮具有毒性，对人体中枢神经系统的有麻醉作用，出现乏力、恶心、头痛、头晕、易激动。重者发生呕吐、气急、痉挛，甚至昏迷。对眼、鼻、喉有刺激性。口服后，先有口唇、咽喉有烧灼感，后出现口干、呕吐、昏迷、酸中毒和酮症。长期接触该品出现眩晕、灼烧感、咽炎、支气管炎、乏力、易激动等。皮肤长期反复接触可致皮炎。 微核测试法是一种被广泛应用于检测和监察各种理化因子对机体的致癌、致突变效应的方法.Hooftman等人最早将微核应用于鱼类，并首次证明了化学诱变剂甲基磺酸乙酯 (EM$)能诱发泥鳅外周血红细胞微核的形成 。鱼类对化学物质的反应与哺乳动物有很多相似之处，因而常被用于检测水死亡体的污染情况。近年来，相关研究表明，泥鳅作为生物监测材料，具有较高的敏感性，较之蝌蚪，具有取材容易、涂片方便、室内易饲养成活等优点。本研究以泥鳅为实验材料，采用微核测试法研究不同浓度丙酮对泥鳅红细胞微核率的影响，旨在了解丙酮对机体可能存在的遗传毒理效应。 实验原理 微核 （Micronucleus）：微核主要是由外界损害因素(生物、物理、化学)作用致使细胞染色体丢失或断裂，在有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片或染色体因纺锤体受损而在分裂过程中行动滞后，分裂末期不能进入主核，形成了主核之外的核块，而在细胞浆中形成1个或数个独立于主核、直径小于主核的1/3、染色与主核一致但比主核淡的核小体，因比主核小，故称为微核。微核率的大小与作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关。 1．1 材料 泥鳅购大学城永辉超市，体长(10±2．0) cm。试验前暂养在经曝气3 d的符合饮用水标准的 自来水中，每天投喂食物(金鱼饵料)，每24 h换水1次。试验时挑选健康活泼、体表无损的个体进 行染毒处理。整个试验期间的水温25～27℃ 。 2．1 方法 2．1．1.处理 设置一组空白对照组，四组实验组，丙酮浓度分别为2.5、5.0、7.5、10.0ml/l。把泥鳅分别放五条进去，处理3天。 2.1.2. 血涂片制备及染色 取各处理组泥鳅断尾取血，制成血涂片，自然晾干。在晾干的血涂片上滴加瑞氏一姬姆萨复合染液2—5滴，染色10min。用蒸馏水冲洗后，待自然干燥。每个浓度做3条泥鳅，每条泥鳅做3-4个血涂片。 2.1.3镜检 将做好的血涂片置于高倍镜下观察。统计微核率，并以千分率表示。 2.1.4计算 微核率=微核细胞数÷观察红细胞总数％o； 微核评定标准：微核存在于胞质中、大小为主核的1／10～1／30、圆形或椭圆形、颜色与主核一致或略浅于主核 。 3.结果与分析 不同丙酮浓度对泥鳅红细胞微核的影响 浓度 空白 2.5ml/L 5 ml/L 7.5 ml/L 10 ml/L 组数 细胞数总数 其中的微核细胞数 微核细胞率 ‰ 细胞数总数 其中的微核细胞数 微核细胞率 ‰ 细胞数总数 其中的微核细胞数 微核细胞率 ‰ 细胞数总数 其中的微核细胞数 微核细胞率 ‰ 细胞数总数 其中的微核细胞数 微核细胞率 ‰ 第一组 635 4 6.30 684 10 14.62 749 16 21.36 653 28 42.29 671 39 58.12 第二组 678 3 4.42 756 15 19.84 768 24 31.25 732 28 38.25 750 42 56.00 第三组 934 6 6.42 839 12 14.30 870 27 31.03 966 36 37.27 886 48 54.18 不同丙酮浓度对泥鳅红细胞微核的影响 浓度（ml/l） 微核 细胞率‰ 组别 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 总和 第一组 6.30 14.62 21.36 42.29 58.12 第二组 4.42 19.84 31.25 38.25 56.00 第三组 6.42 14.30 31.03 37.27 54.18 y. 17.14 48.76 83.67 117.81 168.30 435.68 y.2 293.78 115.93 7000.67 13879.20 28324.89 49614.47