3大肠杆菌感受态细胞制备及转化.ppt

自前往后分别为：超螺旋、线性及开环质粒DNA 实验四大肠杆菌感受态制备及外源DNA的转化 实验目的 1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。 3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。 实验原理 转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。 外源DNA导入细菌的几种方法 （1）转化（transformation) 感受态细菌捕获质粒DNA的过程 （2）转染（transfection) 细菌捕获噬菌体DNA的过程 （3）转导（transduction） 借助噬菌体把外源DNA导入受体细菌的过程 实验原理 转化方法：电击法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法 感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。 转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。 实验原理 基 本 原 理 感受态（Competence)： 细菌处于容易吸收外源DNA的状态 转化（transformation)： 异源DNA分子导入受体细胞的过程