紫外法测核酸.ppt

* * * * * * * * * * * * * * 紫外法测量核酸浓度 Contents 目录 实验原理 实验方法 注意事项 分析与拓展 实验原理 01 核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。为每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。该法操作简便，迅速，并对被测样品无损，用量也少。 。 结构基础 1-1 计算方法 1-2 试液中DNA / RNA总含量按最下所示计算： 式中 甲A 260 ——被测稀释液在260nm处的总光密度值； 乙A 260 ——加沉淀剂除去大分子核酸后被测稀释液在260nm处的光密度值； 两者之差（甲A 260 －乙A 260 ）为被测稀释液的光密度值； V B ——被测试液总体积（mL） D——样液的稀释倍数。 0.020——脱氧核糖核酸的比消光系数，即每毫升含1mu;gDNA钠盐的水溶液（pH为中性）在260nm波长处，通过光径为1cm时的光密度值。 0.022——核糖核酸的比消光系数，是浓度为1mg/L的核糖核酸水溶液（pH为中性）在260nm波长处，通过光径为1cm时的光密度值。 由于大分子核酸易发生变性，此值也随变性程度不同而异，因此一般采用