8环保用酶制剂的生产与应用课件.ppt

环保用酶 用于固定化的酶，起初采用的都是经提取和分离纯化后的酶。 随着固定化技术的发展，也可采用含酶菌体或菌体碎片进行固定化，称为固定化菌体或固定化死细胞。 1973年，日本首次成功应用固定化大肠杆菌菌体中的天门冬氨酸酶，由反丁烯二酸连续生产L-天门冬氨酸。 酶和细胞固定化示意图 （1） 吸附法 1、物理吸附：利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上。  优点： 吸附法制备固定化酶或细胞，操作简便，条件温和，不会引起酶变性失活载体廉价易得，而且可反复使用。 缺点： 靠物理吸附作用，结合力较弱，酶与载体结合不牢而容易脱落。 缺点： 离子键结合力较弱，酶与载体不牢固； 在pH和离子强度等条件改变时，酶容易脱落。所以，用此种酶时，要严格控制好pH、离子强度和温度等操作条件 要使载体与酶形成共价键，必须首先使载体活化，即借助于某种方法，在载体上引进某一活泼基团。然后此活泼基团再与酶分子上的某一基团反应，形成共价键。 常用活化方法有： 重氮法、溴化氢法等。 A．重氮法 反应示意式如下（该方法需要载体具有芳香族氨基） B ．溴化氰法 本方法主要用溴化氰（CNBr）活化多糖类物质。如纤维素、葡聚糖、琼脂糖等. 常用的凝胶有琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、明胶等天然凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂等合成凝胶。 天然凝胶在包埋时条件温和，操作简便，对酶活性影响少，但强度较差； 合成凝胶虽强度高，对温度、pH变化的耐受性强，但需在一定的条件下进行聚合反应，才能把酶包埋起来，易引起酶失活变性，应控制好包埋条件。 仅适用于底物和产物都是小分子物质的酶的固定化。 如何选择固定化方法？ 必须对酶的性质有所了解，根据实际条件和要求，选择适当方法。 ① 酶的稳定性（热、pH、对某些化学试剂的敏感性）； ② 活性中心和必需基团的性质； ③ 酶的抑制剂和激活剂； ④ 载体的来源、价格、机械性能、载体的功能基团和交联度等。 （二）固定化酶反应条件的变化 酶经固定化后，其催化反应特征会发生变化，具体表现在以下几个方面： 1、酶活力回收率变化 ——固定化酶所保留下来的酶的活力与游离酶在固定化之前的酶活力之比，也叫残存活力等。 固定化后，酶活力往往下降。 2、底物专一性变化 对于作用与大分子底物的酶，当其固定化于水不溶性载体之后，往往由于空间障碍，而使酶对分子质量大的底物的催化活大大下降 3、反应最适pH值变化 固定化后往往发生不同程度的变化。 4、反应最适温度 往往高于游离酶。 5、米氏常数Km的变化 Km值随载体性质变化 6、最大反应速度 基本相同，少数例外。 与溶液酶相比，固定化酶总会在某些方面有所不同； 机理讨论目前还很肤浅。 二、酶反应器 酶催化反应过程示意图 理想的酶反应器的要求 生物反应器设计的主要目标： 使产品的质量最高，生产成本最低。 评价生物反应器的主要标准： 反应器生产能力的大小和产品质量的高低。 (1)间歇式酶反应器 又称为批量反应器（Batch Reactor BSTR）、间歇式搅拌罐、搅拌式反应罐。其特点是：底物与酶一次性投入反应器内，产物一次性取出；反应完成之后，固定化酶（细胞）用过滤法或超滤法回收，再转入下一批反应。 优点是：装置较简单，造价较低，传质阻力很小，反应能很迅速达到稳态。 缺点是：操作麻烦，固定化酶经反复回收使用时，易失去活性，故在工业生产中，间歇式酶反应器很少用于固定化酶，但常用于游离酶。 (2) 连续式酶反应器 又称为连续搅拌釜式反应器（Continuous Stirred Tank Reactor, CSTR）、连续式搅拌罐。向反应器投入固定化酶和底物溶液，不断搅拌，反应达到平衡之后，再以恒定的流速连续流入底物溶液，同时，以相同流速输出反应液（含产物）。 优点是：在理想状况下，混合良好，各部分组成相同，并与输出成分一致。 缺点是：搅拌浆剪切力大，易打碎磨损固定化酶颗粒。 (3) 填充床反应器 填充床反应器（Packed Reactor,PBR）,又称固定床反应器。将固定化酶填充于反应器内，制成稳定的柱床，然后，通入底物溶液，在一定的反应条件下实现酶催化反应，以一定的流速，收集输出的转化液（含产物）。 优点是：高效率、易操作、结构简单等，因而，PBR是目前工业生产及研究中应用最为普遍的反应器。它适用于各种形状的固定化酶和不含固体颗粒、黏度不大的底物溶液，以及有产物抑制的转化反应。 缺点是：传质系数和传热系数相对较低。当底物溶度含固体颗粒或黏度很大时，不宜采用PBR。 (4) 流化床反应器 流化床反应器（Fluidized Bed Re