吡格列酮对AD模型大鼠学习记忆障碍的保护作用研究.docVIP

吡格列酮对AD模型大鼠学习记忆障碍的保护作用研究 　　摘要：目的 研究吡格列酮（Pioglitazone， Pio）对Aβ25-35 所致的大鼠学习记忆障碍的保护作用。方法 双侧海马CA1区注射β-淀粉样蛋白（Aβ25-35）建立AD大鼠模型。用不同剂量吡格列酮（40、80mg/kg）灌胃4w后，进行Morris水迷宫定位航行和空间探索实验，观察吡格列酮对AD模型大鼠学习记忆障碍的保护作用。结果 海马CA1区注射Aβ25-35后，模型组逃避潜伏期明显延长，穿越平台次数明显减少，平台滞留时间明显缩短；吡格列酮组与模型组相比较，逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数明显增多，平台滞留时间明显延长；吡格列酮组较正常对照组无明显差异。结论 海马CA1区注射Aβ25-35可导致大鼠学习记忆障碍，吡格列酮对β淀粉样蛋白引起的大鼠学记忆障碍有改善作用。 　　关键词：吡格列酮；β淀粉样蛋白；海马 　　随着人口老龄化的进展， 阿尔茨海默病（AD）的患病率逐年递增，危害性不断增加。降低AD的发病率，进行有效地防治成为老年神经病学研究领域不容忽视的问题。AD典型病理改变为老年斑（SP）、神经原纤维缠结（NFT）及神经元丢失。β淀粉样蛋白（Aβ） 是老年斑的主要成分，其过量生成和沉积，会引起一系列反应，导致学习记忆减退，认知障碍等临床表现，因此，β淀粉样蛋白被认为是AD发病机制中的起始因素和关键环节[1]。Aβ降解减少或生成增加均可导致Aβ的异常沉积，导致AD的发生[2]。吡格列酮属于噻唑烷二酮类药物， 是一种新型胰岛素增敏剂，能够增强细胞对胰岛素作用的敏感性， 减轻胰岛素抵抗，主要用于2 型糖尿病及胰岛素抵抗的治疗。一些研究表明，吡格列酮可过激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）有潜在治疗神经变性疾病的可能[3]。本实验采用双侧海马CA1区注射β淀粉样蛋白造模方式，研究吡格列酮对大鼠的学习记忆的改善作用。 　　1动物与材料 　　雄性Sprague-Dawley 大鼠，340～380g，由西安交通大学医学部动物实验中心提供（动物合格证号：SCXK（陕）2012-003）。β淀粉样蛋白（美国Sigma 公司，A4559-MG），用DMEM 溶解，37℃孵育5d，使其成为聚集状态。吡格列酮（日本Takera公司，纯度99%）。脑立体定位仪（Narishige SN-3，日本）；Morris水迷宫（成都泰盟科技有限公司，MT-200，四川）。 　　2方法 　　SD大鼠40只， 随机分为4组， 即对照组， 模型组， 低剂量吡格列酮治疗组， 高剂量吡格列酮治疗组， 每组10只。大鼠用10%水合氯醛（ 4mL /kg）腹腔注射麻醉后，头颅固定在脑立体定位仪上，头皮备皮，消毒手术区皮肤，无菌下操作，做正中切口暴露前囟，参照大鼠脑立体定位图谱，以前囟为原点，向后3.0mm， 旁开2.0mm，为穿刺点，钻开颅骨，自脑表面用微量进样器进针3.0mm至海马。对照组每侧海马注射生理盐水3μl，其余3组每侧海马注射5μg Aβ25 - 353μl，缓慢注射后，停针5min。缝合，保暖观察至动物苏醒。 　　建模后第2d开始，低、高剂量组分别给予吡格列酮40mg/kg、80mg/kg， 溶于3ml生理盐水中灌胃。对照组和模型组给予等量生理盐水。灌胃4w。 　　Morris水迷宫实验：水迷宫为直径120 cm， 高50 cm， 水深30 cm，逃逸平台位于水下1cm，水温控制在（25±2）℃，平台置于第四象限， 从4个象限等距标记4个入水点， ①定位航行试验 （place navigation test）：治疗结束后第1d开始，共5d，每天分上、下午各4次，分别从4个不同象限，将大鼠头朝池壁放入水中，记录其2min内寻找平台所需时间（逃避潜伏期）。若大鼠入水后2min内未能找到平台，则将其置于平台上并停留10s，引导学习记忆，逃避潜伏期记录为120s。②空间探索试验（ spatial probe test）：实验第6d撤除平台，将动物将大鼠面向池壁从4个不同象限放入水池，测试2min内跨越原平台位置的次数。数据应用SPSS16.0 进行分析，采用均值比较、一维方差分析统计学处理， 以P0.05来表示差异的显著性。 　　3结果 　　Morris 水迷宫实验显示，对照组潜伏期为（12.74±1.74）s，模型组潜伏期延长为（38.43±3.87）s，对照组穿越平台次数为7.25±3.57，模型组穿越平台次数减少为3.47±1.26，对照组的平台滞留时间为（2.5±1.27）s，模型组平台滞留时间缩短为（1.03±0.61）s。对照组与模型组有显著性差异（P0.05）。 　　吡格列酮治疗组与模型组比较，低剂量组的潜伏期为（20.19±2.51）s、高剂量