丛生盔形、澄黄滨和滨珊瑚.docVIP

丛生盔形、澄黄滨和滨珊瑚 的核糖体18s rDNA分析 靳丽敬，黄飞，石耀华* （海南大学海洋学院水产养殖学系，海南 海口，570228） 摘要：本实验采用PCR技术扩增南海三种珊瑚核糖体18s rDNA基因，测序获取相关序列，利用Clustal和mega软件进行序列比较和聚类分析，构建NJ 和 MP 系统学分支图，分析它们之间的系统演化关系。 实验结果表明，同一物种丛生盔形，采自洋浦的珊瑚聚类在一起，而来自其他地点的珊瑚遗传聚类在一起。滨珊瑚来自于木兰头聚类在一起，来自于其他地点又聚类在一起。澄黄滨珊瑚的两个样本虽然根据表型性状进行分类时是同一种，但聚类于不同的分支，表明二者在该基因上的差异十分显著遗传结构上有很大的差距；其原因可能有两个：一是这种差异是可观存在的，澄黄滨珊瑚彼此间核糖体18s rDNA基因真实存在差异，另一种可能是在采集珊瑚初步分类等过程中将其误作澄黄滨珊瑚。 关键词：丛生盔形；滨珊瑚；澄黄滨；核糖体18s rDNA；系统学 珊瑚礁生态系统是地球上多样性程度最高的生态系统之一，为超过25％的海洋生物提供栖息场，珊瑚礁生态系统具有极丰富的生物资源，是渔业的繁殖基地，为人类提供重要的食物和药物资源。珊瑚礁的前身．古代的生物礁，蕴藏着极其丰富的油气资源和其他矿产资源，是人类的巨大财富；珊瑚和珊瑚礁在其生长和发育过程中记录下大量环境因素的数据，因而，它又是科学研究中长期环境变化的巨大信息资料库。 自然界珊瑚的种类众多，珊瑚的分类以及不同种珊瑚之间的系统学关系多数是基于外表性状（包括共生藻呈现的颜色）进行的；珊瑚的表型性状较少，有的非常相近，难以区分。核酸是生物表型性状内在的遗传物质基础，生物在长期的系统演化过程既是一个核酸分子由于突变和重组等原因不断产生差异的歧化过程，也是物种之间亲缘关系远近得到了保留和体现的过程。核糖体18s rDNA在生物中具有一定的保守性，通过分析不同珊瑚的核糖体18s rDNA分子的核酸组成，可以从分子水平阐明珊瑚之间的系统性亲缘关系，也有利于了解珊瑚的分布特征，有助于珊瑚生态系统保护与恢复。 1 实验材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 仪器设备 PCR仪、离心机、恒温水浴锅、移液器、吸头、离心管、琼脂糖电泳系统、制胶盘、剪刀、镊子、灭菌锅、凝胶成像系统等 1.1.2 试剂 海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒（GA缓冲液，蛋白酶K，GB，GD缓冲液，PW漂洗液，TE缓冲液）、无水乙醇、灭菌去离子水、琼脂糖、Goldview染色剂，Taq DNA polymerase、dNTP、10× PCR buffer、MgCl2，1%的琼脂糖凝胶，DNA Marker 2000等。 1.1.3 实验材料 在从南海近岸海区随机采集丛生盔形、澄黄滨和滨珊瑚三种珊瑚样品，采样地点具体见表1。 表1 三种珊瑚实验材料的采集地点、编号 Tab.1????????? 初步鉴定物种名 采样地 样品编号 Galaxea fascicularis 小东海 GF-1 Galaxea fascicularis 海尾 GF-2 Galaxea fascicularis 洋浦 GF-3 Galaxea fascicularis 八所 GF-4 Galaxea fascicularis 小东海 GF-5 Galaxea fascicularis 洋浦 GF-6 Galaxea fascicularis 洋浦 GF-7 Galaxea fascicularis 木兰头 GF-8 Galaxea fascicularis 洋浦 GF-9 Galaxea fascicularis 洋浦 GF-10 Galaxea fascicularis 海尾 GF-11 Porites lutea 临高 PL-1 Porites lutea 海尾 PL-2 Porites porites 海尾 PP-1 Porites porites 木兰头 PP-2 Porites porites 龙湾 PP-3 Porites porites 海尾 PP-4 Porites porites 海尾 PP-5 Porites porites 临高 PP-6 Porites porites 临高 PP-7 Porites porites 临高 PP-8 Porites porites 木兰头 PP-9 1.2 实验方法 1.2.1 材料的采集 从海南到近岸海区随机采集丛生盔形、澄黄滨和滨珊瑚，95%乙醇浸泡，2小时内更换一次乙醇，4小时后再更换依次乙醇，作为实验材料。 1.2.2 材料DNA的提取 ①切取不多于30mg珊瑚表体组织于研钵中