第二章 预处理技术课件.ppt

第二章 预处理技术 发酵液预处理的目的和内容 ②相对纯化。 常用的方法有加水稀释法和加热法。加水稀释法会加大后续过程的处理任务。 此法是发酵工业中发酵液预处理较常用的方法之一，方法简单有效、成本低廉。 如利用酸碱性来调节pH值使蛋白质等两性物质达到等电点得以除去。又如过滤中，发酵液中的大分子物质易与膜发生吸附，通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质，即可减少堵塞和污染。 助滤剂的微粒大小、粒度分布及添加量 对过滤速度影响很大。 采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态，使其聚结成较大的颗粒，便于提高过滤速率。常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理。 凝聚——是指在某些电解质作用下，破坏细胞，菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使胶体粒子聚集的过程。 原理：发酵液(培养液)中细胞、菌体或蛋白质等胶体粒子的表面都带有同种电荷，使得这些胶体粒子之间相互排斥，保持一定距离而不互相凝聚。另外，这些胶体粒子和水有高度的亲和性，其表面很容易吸住水分，形成一层水膜，从而使胶体粒子呈分散状态。在发酵液(培养液)中加入电解质，就能中和胶体粒子的电性，夺取胶体粒子表面的水分子，破坏其表面的水膜，从而使胶体粒子能直接碰撞而聚集起来。 阳离子对带负电荷的凝胶凝聚能力的次序为： Al3+Fe 3+ H+ Ca2+ Mg2+ K + Na + Li + 絮凝——指使用絮凝剂(通常是天然或合成的大相对分子质量物质)，在悬浮离子之间产生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。 絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子（如---COOH）或阳离子（如---NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。 它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架连接时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。 第四节 细胞破碎 1.直接测定法 2. 目标产物测定法 3. 测定导电率 不宜采用高压匀浆法的微生物： 易造成堵塞的团状或丝状真菌， 较小的革兰氏阳性菌， 含有包含体的基因工程菌（因包含体坚硬，易损伤匀浆阀） ②影响细胞破碎的因素 b.珠体的装量 （3）超声波破碎法 （3）超声波破碎法 超声波破碎法在实验室和小规模生产中应用较广。操作时常应把悬浮液预先冷却到0～5℃，并且还应在夹套中连续通入冷却剂进行冷却。 细胞破碎方法： 选择破碎方法时，需要考虑下列因素： 第五节 离心技术 离心分离是基于固体颗粒和周围液体密度存在差异，在离心力场中使不同密度的固体颗粒加速沉降的分离过程。 当物体围绕一中心轴做圆周运动时，运动物体就受到离心力的作用。旋转的速度越高，运动物体所受到的离心力越大。如果装有悬浮液或高分子溶液的容器进行高速水平旋转，在相同转速条件下，容器中不同大小的悬浮颗粒或高分子溶质会以不同的速率沉降。 （1）差速离心法 通过控制不同的离心力和离心时间，使沉降速度不同的颗粒逐级分离的方法。操作时选用悬浮液来进行分离，先选择好离心力和离心时间，使悬浮液中最大的颗粒先沉淀，取出上情液，然后加大离心力再进行分离，沉淀出较小的颗粒，如此多次分离，达到逐级分离的目的。 （1）差速离心法 差速离心法的分辨率不高，沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不易分开，常用于粗制品的提取，如细胞均浆中细胞器的分离。 （2）速率区带离心法 也称一般密度梯度离心法，是在离心管中事先加入某种低分子溶液(蔗糖、甘油等)，调配好密度梯度，在密度梯度溶液得顶部加待处理得样品，然后离心，使沉降系数比较接近得物质得以分离得一种区带分离方法。 梯度介质不与目的组分反应，不引起分离组分得变性、失活。用于形成密度梯度介质很多，较常用得是蔗糖、甘油、硅胶等。 步骤： 1)在离心管中装入密度梯度溶液，溶液的密度从离心管顶部至底部逐步增加（正 梯度） 2)将所需分离的样品小心地加至密度梯度溶液的顶部。样品在梯度溶液表面形成 一负梯度。 3)由于不同大小的粒子在离心力作用下梯度中移动的速度不一样，所有经过离心后，会形成几条分开的样品区带。  （3）等密度离心法 是欲分离的物质颗粒的密度范围在离心介质的密度梯度范围内时，在离心力作用下，不同密度的颗粒向上或向下移动，直到颗粒的浮力密度与梯度密度相等，形成区带。 常用介质一般为CsCl、KBr、NaI等，首先将待分离的样品铺成在梯度液顶上或与梯度液均匀混合，然后离心。 步骤： 在分离开始前，样品可与梯度介质混合在一起，或铺在密度梯度液上面。在离心力的作用下，梯度物质在离心管中重新分布，因而形成了所需要的浓度