生物化学实验(食品)课件.ppt

生物化学实验内容 1、 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质 2、双缩脲测定蛋白质的含量 3、 血液葡萄糖的测定 4、 牛乳酪蛋白提取与鉴定 5、 维生素C的提取与含量的测定 6、 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 7、 酶的基本性质 要求：课前预习，试验中做记录，课后写实验报告。 两人一组，离开实验室时签字。 实验一 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 一、目的： 了解电泳技术基本原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳操作技术。 二、原理： 蛋白质是两性电解质，在非等电点状态下在电场中会向一定电极移动。在碱性条件下多数蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动 ， 不同蛋白质由于大小、所带电荷及形状不同，在电场中的迁移率不同，经过电泳可将其分开，结果经染色、漂洗，得电泳图谱。 材料 ：血清 电泳装置 实验二 双缩脲测定蛋白质含量 一、实验目的 掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理 二、实验原理 双缩脲在碱性溶液中与Cu2+产生紫色的络合物,这一反应称“双缩脲反应”。蛋白质分子中肽键，也能与Cu2+ 发生双缩脲反应，溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。该紫色的络合物在580nm处有最大吸收值。 三、实验步骤 1、标准曲线制作（已制好） 2、样品测定 3、结果计算 实验三 血液葡萄糖的测定 一、实验目的 学习和掌握Folin-吴宪法测定血糖的方法 二、实验原理  实验四 牛奶中蛋白质的提取与鉴定 一、实验目的 学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验 二、实验原理 蛋白质等电点 沉淀 三、实验步骤 1、酪蛋白的制备 鲜牛乳3Oml（40℃）+3Om醋酸缓冲液（40℃） 2、酪蛋白的性质鉴定 （1）溶解度观察 2.米伦反应： 少许酪蛋白+lml H2O+米伦试剂10滴， 振摇，加热 观察其颜色变化 实验五 维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法） 一、实验目的 掌握滴定法测定Vc含量的原理和操作。 二、实验原理 三、实验步骤 1.提取: 2.0克松针（2份）+少量 2%草酸 匀浆 过滤后用2%草酸定容到50毫升 （也可先定容后过滤或离心） 一、实验目的 了解琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制剂对其活性的抑制。 二、实验原理 三、实验步骤 1、酶的制备 猪心1.5～2g +1/15M磷酸氢二钠溶液3～4ml 匀浆 1/15M磷酸氢二钠溶液6～7ml，放置30min 2000r/min 离心10min，取上清备用。 实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 三、操作步骤 （一）温度对酶活性的影响 （唾液淀粉酶的制备：取漱口水0.5Ml，稀释至50ml，以下简称酶液） 1、 取3支试管，编号后按下表操作 三、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 （氯离子是唾液淀粉酶的激活剂，铜离子是抑制剂）：取小试管3支，按表操作 恒温水浴锅 电磁炉水浴锅 电子天平 需冷藏、冷冻试剂和材料放在冰柜和冰箱 注意 生物材料及试剂在冰箱中，取完放回原处。 请勿将固体物质扔进水槽，台面上有垃圾盆。 水槽上有蒸馏水管，节约使用。 用过器皿立即用水洗净。 做完实验清理台面，将实验用具清洗后放入洗涤柜。 实验报告 一、目的 二、原理（必须写清楚！） 三、实验材料 四、实验步骤 五、结果与分析 2、滴定 （1）标定染料（标准维生素C液滴定）：准确吸取标准维生素C溶液10毫升（含1.0毫克维生素C）置100毫升锥形瓶中，用微量滴定管以0.1%2，6一二氯酚靛酚滴至淡红色出现，15秒钟不退色即为滴定终点。记录所用染料体积计算出1毫升染料相当于多少毫克维生素C（K值），即1/染料ml。 (2)样液滴定:准确吸取滤液10毫升放人100毫升锥形瓶内，滴定方法同前(做两次平行试验)，记录染料体积。 (3)空白液滴定：准确吸取10毫升2%草酸溶液，放入100毫升锥形瓶中，用上述方法滴定至终点，记录所用染料体积。（滴定过程宜迅速，一般不超过2分钟） X = （V1－V2）×K×V W×V3 ×100 X ：100克样品所含维生素C毫克数 W ：称取样品毫克数 V1：滴定样品所用染料毫升数 V2：滴定空白所用染料毫升数 V3：样品测定时所用滤液毫升数（即10毫