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第二节动物性食品中大肠菌群的检验.ppt 46页

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第二节 食品中大肠菌群的检验 一、实验目的 1. 了解大肠菌群在食品检验中的意义。 2. 掌握检验的程序和步骤。 3. 通过MPN检索表的检索得出实验结果。 二、基本原理 大肠菌群系指一群在32~37℃下24hr内,能发酵乳糖产酸、产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标,来评价食品卫生质量,具有广泛的卫生学意义。 食品中大肠杆菌群数是以每100mL(g)检样内大肠菌群最近似数(MPN)来表示,据此含义,所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群数均应为100mL(g)食品内允许含有大肠菌群的实际数值,为报告标准。 三、检测方法 1、牛天贵主编《食品微生物学实验技术》实验十二 大肠菌群检验 2、GB 4789.3-2010 《大肠菌群计数》 3、大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法 4、美国FDA标准方法(行业标准采用两步法):用于对出口食品中大肠菌群进行检验 一、牛天贵主编《食品微生物学实验技术》 实验十二 大肠菌群检验 实验操作步骤: 实验所需培养基及作用 乳糖胆盐发酵管(初发酵) 伊红美蓝琼脂培养基(鉴别培养基 分离培养) 乳糖发酵管(复发酵) 1、乳糖胆盐发酵管 成分:蛋白胨20g、猪胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸馏水1000mL,pH值7.4 制法:略 实验现象:如图 2、伊红美蓝琼脂培养基(EMB) 成分:蛋白胨10g、乳糖10g、K2HPO42g、琼脂17g,2%伊红Y溶液20mL、0.65%美蓝溶液10mL,蒸馏水1000mL,pH值7.1 制法:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH值,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用;临用时加入乳糖(115 ℃20min)并加热融化琼脂,冷至50~55 ℃,加入伊红和美蓝溶液),摇匀后倾注平板。 2、伊红美蓝琼脂培养基(EMB) 现象及原理 大肠杆菌:菌落深紫色,且有绿色金属光泽; 产酸能力较弱的几种肠道菌:也有相应的棕色; 不发酵乳糖的肠道菌:菌落是无色透明的,比如变形菌属,沙门氏菌属 3、乳糖发酵管 成分:蛋白胨20g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸馏水1000mL,pH值7.4 制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH值,加入指示剂,分装3mL试管,并放入一个小倒管,115℃灭菌15min。 实验操作步骤: 1)检样稀释(无菌操作) ①将25mL(或g)检样置于含225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶,充分振摇(固体检样用匀浆器,用8000-10000r/min的速度处理1 min)制成1:10的均匀稀释液。 ②用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,混匀,制成1 :100的稀释液。 ③另取1mL灭菌吸管,按②操作依次做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1 mL灭菌吸管。 2)乳糖发酵实验 接种1mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内。接种3个稀释度,每一稀释度接种3管,置(36土1)℃温箱内培养(24士2) h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠杆菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。 实验报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(或g)大肠菌群的MPN。 结果表示方法:120MPN/100mL(g) 附表:大肠菌群最大可能数(MPN)检索表 注: ①本表采用3个稀释度:1ML(g),0.1mL(g)和0.01 mL (g)。每稀释度3管。 ②表内所列检样量如改用10mL(g),1mL(g)和0.1mL(g)时,表内数字应相应降低10倍;如改用0.1ML(g), 0.01ML(g)和0.001mL(g)时,则表内数字应相应增加10倍,其余可类推。 表 10毫升、1毫升、0.1毫升检样各接种3管的大肠杆菌最近似数检索表 相 关 视 频 /special/show_2572599/NxNdU7DdVMbScZ8e.html 二、 GB 4789.3-2010 《大肠菌群计数》 第一法:大肠菌群MPN计数法 第二法:大肠菌群平板计数法 需要用到的培养基 (1)LST肉汤培养基:月桂基硫酸盐胰蛋白胨 成分:胰蛋白胨或胰酪胨(Tryticase)20g,NaCL 5.0g,乳糖5.0g,K2HPO4 2.75g,KH2PO4 2.75g,月桂基硫酸钠0.1g,蒸馏水1000mL。 制法:将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵管的20mm×150mm试管中,每管10mL。121℃高压灭菌15min。最终pH6.8±0.2。 (2)BGLB:煌绿乳糖胆盐肉汤 成分:蛋白胨10.0g,乳糖10.

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