阎实验六生理生化.ppt

葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 →二乙酰→红色化合物 + 胍基化合物 葡萄糖→丙酮酸 实验要求 每个人做1个平板的化学因素对微生物生长的影响 每个人做IMViC 与硫化氢试验中的一个小实验 * （一 ）化学因素对微生物生长的影响 （二）细菌的生理生化反应 实验六 实验目的： 了解常用化学消毒剂对微生物的作用 实验一 化学因素对微生物生长的影响 常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类、有机溶剂（酚、醇、醛等）、卤族元素及其化合物、染色剂和表面活性剂等。 实验原理： 1 氧化剂：通过强烈的氧化作用杀死微生物。 碘的杀菌力强，3－7％碘溶于70－83％的乙醇中 成碘酒。 2 重金属盐类：使蛋白质变性、沉淀，使酶失活。 0·02－0·2％HgCl2（升汞）溶液对大多数细菌有致死作用。 3 有机溶剂：使蛋白质及核酸变性、破坏细胞膜透性，抑制脱氢酶，氧化酶活性。 乙醇（70%） 4 表面活性剂：具有降低表面张力效应的物质，可抑菌或杀菌。 甲酚杀菌力最强 煤酚皂液（来苏尔）为甲酚和肥皂的混合液。 新洁尔灭：破坏细胞的渗透性 实验材料 1 菌种： 大肠杆菌 2 培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 3 消毒剂： 2.5%碘酒，0.5%石碳酸，75%乙醇， 100%乙醇，1%来苏尔， 0.25%新洁尔灭，无菌生理盐水 实验步骤 1 倒牛肉膏蛋白胨平板 2 取0.2ml大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。 3 将平板(皿底）划分为6等份，分别将浸有各种消毒剂的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。 4 将贴好滤纸片的含菌平板，置37℃倒置培养24-48h。 5 测量并记录抑菌圈的直径，根据其直径的大小，可初步确定测试药品的抑菌效能。（自带尺子） 实验结果 思考题 书p97思考题第11题 0.25%新洁尔灭 75%乙醇 1%来苏尔 100％乙醇 5%石炭酸（苯酚) 2.5%碘酒 抑（杀）菌圈直径/mm 消毒剂 抑（杀）菌圈直径/mm 消毒剂 实验二：细菌的生理生化反应 （IMViC 与硫化氢试验） 吲哚（I）、甲基红（M）、V.P.试验（Vi）、柠檬酸盐利用（C）试验。用以将大肠杆菌与其形状十分相近的肠杆菌属的细菌鉴别开来。 实验目的： 1 学习几种主要微生物的生理代谢试验及检验方法 认识微生物代谢类型的多样性。 2 了解IMViC反应在肠道菌鉴定中的意义和方法 实验原理： 1 吲哚试验 ： 用来检测吲哚的产生，有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙氨酸。 吲哚 + 对二甲基氨基苯甲醛 红色的玫瑰吲哚 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 吲哚试剂 2 甲基红试验（M.R） ： 大肠杆菌与产气肠杆菌在利用葡萄糖进行发酵时，前者可产生大量的混合酸，使pH﹤4.5；后者则产生大量的中性化合物丁二醇，pH﹥4.5，因此在发酵液中加入甲基红试剂时，前者呈红色，后者呈黄色。 葡萄糖 乳酸 丙酮酸 乙醛 乙酰CoA 甲酸 乙醇 ?乙酰乳酸 二乙酰 3-羟基丁酮 2,3-丁二醇 CO2 H2 ?-乙酰乳酸合成酶 ?-乙酰乳酸脱羧酶 2,3-丁二醇脱氢酶 一些细菌具有?-乙酰乳酸合成酶系而进行丁二醇发酵。 EMP 产气杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌 3 V.P.试验 碱性条件 氧 红色化合物 （与培养基中精氨酸的胍基结合） 发酵途径： 大肠杆菌－ 产气杆菌＋ 4 柠檬酸盐利用试验： 有些细菌如产气肠杆菌能利用柠檬酸盐作为碳源，产生碱性化合物，使培养基的 pH 升高，当加入溴麝香草酚蓝指示剂时，培养基会由绿色变为深蓝色。 I M Vi C试验 VP test Citrate utilization test Indol test Methyl test — — + + 大肠杆菌 + + — — 产气肠杆菌 C Vi M I 常用于肠道杆菌的鉴定 5