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免疫第二章抗原抗体反应免疫球蛋白的特点：IgG为单体分子，是血清和细胞外液中含量最高的Ig 。 IgM是个体发育过程中最早合成和分泌的Ig.血清IgM升高提示有近期感染，有助于近期感染性疾病的早期诊断。抗原抗体的反应原理：抗原抗体能特异性结合是基于抗原表位和抗体超变区分子区分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原和抗体分子的一级结构决定的。抗原抗体结合力：抗原和抗体的结合完全依靠非共价键的相互作用。最大的是疏水作用力；最小的是范德法力。抗原抗体的亲和力和亲合力：亲和力是指抗体分子上一个抗原结合位点与对应的抗原表位之间相适应而存在着得引力，它是抗原抗体间固有的作用力。抗体超变区和抗原表位之间分子空间构型的吻合程度影响着抗体亲和力。吻合程度越高，亲和力越高。亲和力可用亲和常数KA表示：KA=K1/K2=［Ab-Ag］/［Ab］×［Ag］KA值越大，［Ab-Ag］浓度越大，亲和力越高，抗体抗原结合越牢固，反之，抗原抗体就容易解离。亲和常数还和抗原抗体的灵敏度有关。例如：放射免疫分析的灵敏度与抗体KA成正比，抗血清的KA值达到109 -- 1012mol/L才适合用于放射免疫。3.亲水胶体转化为疏水胶体抗原抗体的结合使电荷减少或消失，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。此时如再加入电解质，如NaCL则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。抗原抗体反应的特点在等价带前后分别为抗体过剩或抗原过剩，形成的沉淀物少或无，这种现象在免疫测定中称为“带现象”。抗体过量时，称“前带”。抗原过剩时称作“后带。”三、可逆性：降低亲和力，增加复合物解离的因素有：PH过高、PH过低、增加离子强度。第三章抗原抗体的纯化离心技术的应用：差速离心的分离效果：粗分离，纯度和效率不高。适应范围：分离细胞器和病毒。第二节沉淀分离一、盐析法常用的盐类：硫酸铵。优点：1溶解度大 2 温度系数小 3 密度小 4 价廉易得高浓度盐析法是由于盐分子与蛋白质分子极化部位相互作用，降低了蛋白质分子的亲水性而将其分级分离，是粗提纯蛋白质类的重要方法。第四节凝胶层析凝胶层析（分子筛层析）：以各种多空凝胶为固定相，利用物质的相对分子量不同而达到分离的一种层析技术。常用的凝胶有：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、基丙烯酰胺和琼脂糖之间的交联物第五节亲和层析法亲和层析法：是利用欲分离物质和它的特意性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一种层析技术。纯化抗血清，先盐析法粗提，再亲和层析法进行纯化常用的载体有：纤维素、琼脂糖凝胶、交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。应用最多的是琼脂糖凝胶。第四章免疫原和特异性抗体的制备以可溶性蛋白为抗原制备相应的抗血清，流程如下：1.抗原的制备与纯化 2佐剂的制备3佐剂与抗原的乳化 4动物的选择5动物的免疫 6试血7采集并收集血清 8血清的纯化、鉴定、保存免疫间隔时间：第一次和第二次免疫之间间隔时间为10-20天。二次以后每次免疫间隔7-10天。免疫途径：腹腔或静脉免疫，抗原能很快入血，常用于加强免疫或颗粒性抗原的免疫。如抗原很宝贵，可采用淋巴结免疫。免疫佐剂：同抗原一起或预先注射到机体内，能增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质。在抗血清制备中应用佐剂的目的是为了提高抗原的免疫原性，从而增强体液免疫和细胞免疫水平，获得高效价的抗体。福氏佐剂：分为福氏完全佐剂（石蜡油+羊毛脂+卡介苗）和福氏不完全佐剂（石蜡油+羊毛脂）第三节单克隆抗体的制备HAT培养基的组成和作用HAT培养基由常用的培养基加入次黄嘌呤（H）氨基蝶呤（A）胸腺嘧啶核苷（T）作用：常用细胞培养基提供细胞生长必需的营养物质；氨基蝶呤（A）为叶酸拮抗物；阻断细胞合成DNA的途径。次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）提供核苷酸合成的前体，使细胞能通过替代途径合成DNA。有限稀释法：理论上是每个培养孔平均含有1个细胞，实际是每孔0、1、或2个。目前最有效的单克隆抗体纯化方法是---亲和纯化法（亲和层析法）第五章沉淀反应第二节凝胶沉淀试验常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺。单向免疫扩散试验Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散（24h）的结果处理。第三节免疫电泳技术一、对流免疫电泳（CIEP）原理：将双向免疫扩散与电泳结合，在直流电场中加速定向扩散的双向免疫扩散技术。在PH8.6的琼脂凝胶中，抗原蛋白等电点（4-5）较低，带较多的负电荷，且分子较小，向正极的泳动速度大于向负极的电渗，抗原泳向正极。抗体蛋白等电点高，带较少的负电荷，且分子较大，向正极的泳动速度小于向负极的电渗，抗体泳向负极。三、免疫电泳（IEP）原理：将蛋白质区带电泳和双向免疫扩散相结合的免疫化学分