EXP8 Vc含量测定课件.pptVIP

EXP.8 维生素C的定量测定 （1）某些果蔬（如橘子、西红柿）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。 * * * * * * * * VC在机体内参与氧化还原反应，是一些氧化还原酶的辅酶，能保护机体中许多含—SH基的酶使之不受氧化； VC在体内能促进胶原蛋白和粘多糖的合成，增加微血管的致密性，降低其通透性及脆性 VC的定量测定方法很多，有2,6–二氯酚靛酚滴定法，碘滴定法，2,4–二硝基苯肼法，Folin试剂比色法，紫外吸收法等。 VC促进免疫球蛋白的合成，增强机体的抵抗力； VC有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用； VC能使氧化型谷光甘肽转化为还原型谷光甘肽（简称GSH），而GSH可与重金属结合而排出体外，因此VC常用于重金属的解毒。 1.实验目的 ?学习Vc 提取和定量测定法的原理方法。 ?熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。 2.实验原理 ? VC 是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid） ?它是具有L 系糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素 ? VC 具有很强的还原性。 ?在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，VC易被氧化而破坏; ?在中性和微酸性环境中，VC能将染料2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型2,6- 二氯酚靛酚。同时VC氧化成脱氢抗坏血酸。 ?当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有VC的酸性溶液时，在VC尚末全部被氧化时，滴下的2,6-二氯酚靛酚立即被还原成无色。但溶液中的VC一旦被氧化时，则滴下的2,6- 二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色 ?∴，当溶液从无色转变成微红色时，即表示溶液中的VC刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点 ?从滴定时2,6- 二氯酚靛酚标淮溶液的消耗量，可以计算出被检物质中VC的含量 ?氧化型的2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈红色 3.试剂材料仪器 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150mL含有52mg NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至250mL，贮于棕色瓶中冷藏（4℃）约可保存一周。每次临用时，以标准VC溶液标定 2%草酸溶液: 1%草酸溶液: 标准抗坏血酸溶液（1mg/mL）: 准确称取100mg纯 抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100mL，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。 4.实验内容 制备含VC的样品提取液 滴定 计算 新鲜果蔬 水洗净 纱布/吸水纸吸干表面水分 称取10-30g 研磨 静置约10min 加入20mL 2%草酸 2层纱布过滤 滤液（如浑浊可离心）滤入50mL容量瓶 反复抽提2～3次 将滤液并入同一容量瓶中 定容 混匀 用 2%草酸 提取液10mL于锥形瓶 滴定 微弱的玫瑰色 终点 整个滴定过程不要超过2min 空白对照 重复2-3次 标准液滴定 准确吸取标准抗坏血酸溶液1mL置50mL锥形瓶中，加9mL 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1mL染料相当于多少mg抗坏血酸（取10mL 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。 ?式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数； C为样品提取液的总毫升数； D为滴定时所取的样品提取液毫升数； T为1mL染料能氧化抗坏血酸毫克数; W为待测样品的重量（g）。 5.计算分析讨论 1)在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有VC的生理作用，但不能将2,6- 二氯酚靛酚还原脱色。 2)生物组织提取物和生物体液中常合有其他还原性物质，其中有些也可在同样实验条件下使2,6?- 二氯酚靛酚还原脱色。 3)在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。 缺点 注意事项 （2）整个操作过程要迅速，防止还原型VC被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用染料不应小于1mL或多于4mL，如果样品含VC太高或太低时，要酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。 （3）本实验须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物质反应进行很慢。 （4）2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶作用，而1%草酸无此作用 （5）干扰滴量因素有：●若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1mL氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。●Fe2+可还原二氯酚靛酚。对含大量Fe2+的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2+不会很快与染料起