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Western Blotting的原理 方法及常见问题分析 2.7 一抗二抗的选择 2.7.1 一抗的选择 2.7.2 二抗的选择 3.3凝胶浓度的选择及配置 3.6蛋白样品变性（时间、温度） 3.6蛋白样品上样（顺序、体积） 3.7电泳 3.9 转膜 时滤纸、胶、膜的叠加顺序 3.13 洗脱 3.14 加二抗（抗体名称、来源、浓度、时间） 3.15 孵育、洗脱 3.16 加ECL发光液 高背景 高背景 高背景 如图所示: 信号弱或者无信号 信号弱或者无信号 信号弱或者无信号 如图所示： 多非特异性条带或条带位置不对 多非特异性条带或条带位置不对 如图所示: 弥散型条带 其他常见问题 其他常见问题 如图所示： * * Western Blotting的原理 实验前应准备的试剂及材料 Western Blotting实验步骤 影响Western blotting成功的要素 常见问题分析与对策 南方医科大学中医药学院分子生物学实验室 一、 概述 通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 Weste