资生堂色谱柱使用及维护课件.pptVIP

* /18 资生堂HPLC色谱柱使用及维护 资生堂色谱知识讲座 先端科学事业推进部 技术中心 资生堂（中国）投资有限公司 北京经济技术开发区景园北街2号BDA国际企业大道31号(100176) TEL：010FAX：010/ * /18 资生堂色谱网站 / 色谱柱使用说明书 * /18 色谱柱的冲洗、保存、故障和对策 * /18 色谱柱的安装和连接 安装色谱柱之前，建议先冲洗设备，并观察系统压力，确保系统各处连接正常 通常，使用不含盐的流动相进行冲洗。如果担心系统中残存盐溶液，为避免盐析，请先使用高水相冲洗后，再置换成不含盐的流动相； 请按照色谱柱标签上的箭头方向来安装色谱柱（左图）。确保配管接头连接正确，并且锥箍的顶端已插入接头内侧(下图)； 安装后，使用不含盐的流动相置换色谱柱保存液后，再用流动相平衡系统和色谱柱。如果担心色谱柱保存液含有盐，请先使用高水相冲洗。 * /18 色谱柱使用注意事项 避免强烈撞击，以防色谱柱劣化 ； 请在压力指示为0时进行色谱柱的安装和拆卸 ； 请在色谱柱正常压力范围15MPa(IF为40MPa)内使用； 流动相pH不要超过色谱柱pH使用范围，不要发生大幅度变化，否则容易劣化； 资生堂C18柱pH2-10（ACR柱pH1-10）, SCX柱pH2-7, NH2柱pH2-8 为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞，建议使用线上过滤器； 柱温越高，越易劣化； 更换流动相时请注意不要盐析。 * /18 离子交换柱使用注意事项 不要使用100%水冲洗色谱柱； 流动相一般为含盐水溶液和有机溶剂，在配制流动相及更换色谱柱时一定注意不要发生盐析； 新SCX柱使用纯乙腈封存，若要置换成含无机盐的流动相，请确保不要发生盐析； 要严格控制流动相pH在使用范围之内 SCX柱pH2-7，NH2柱pH2-8； 色谱柱平衡时间长 NH2柱在水/乙腈系下分析糖类物质时，需要平衡4～5小时； SCX、NH2柱使用含缓冲盐流动相时，最好需要平衡过夜。 * /18 Melamine结构式 平衡60min后 次日 HPLC Conditions: Column: SCX UG80 5μm, 4.6mm i.d.×150mm M.Phase: 50mM KH2PO4 (pH 3.0 adjusted with H3PO4) / CH3CN=70/30 Flow rate: 1mL/min Oven Temp.: 30°C Detector: UV 240 nm Sample: Melamine in M.P. Inj. Vol.: 20μL 使用SCX柱三聚氰胺的分析 平衡2h以上，保留时间稳定 * /18 色谱柱的冲洗 什么情况下需要冲洗色谱柱？ 柱压升高 色谱峰形异常 在强碱性和TFA等强酸条件下使用之后 注意：一般情况下不建议对色谱柱进行冲洗，不冲洗反而更能延长色谱柱的寿命。 * /18 反相系色谱柱该如何冲洗？ 可以用水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，或者用H2O: CH3CN = 1 : 1或 H2O : CH3OH = 1 : 1进行长时间冲洗 。 在乙腈甲醇冲洗过程中，可以重复注射100-200μL四氢呋喃或异丙醇都可以有助于除去强疏水性杂质。 四氢呋喃与乙腈和甲醇的混合物能除去类脂。 用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。 * /18 正相系色谱柱该如何冲洗？ 一般情况下100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉 ，可直接使用其冲洗色谱柱 更换溶剂时注意溶剂间的互溶情况，尤其是水会较大干扰正相检测 * /18 离子交换色谱柱的冲洗 阳离子色谱柱：酸性缓冲盐溶液冲洗 阴离子色谱柱：稀碱缓冲液冲洗 NH2色谱柱：80% CH3CN(pH11、氨水)冲洗NH2柱1～2小时，使在酸性条件下产生的质子化氨基回到初始状态 除去用于离子交换的盐后，可以用水、甲醇、乙腈、二氯甲烷等冲洗 * /18 常规反相色谱柱保存方法 使用间隔为1～2日，请降低流速并连续通液； 短期保存（数周）时，不需要冲洗流动相，拧紧并放好。但使用了强酸强碱流动相时，请使用含有相同有机溶剂组成的中性流动相置换保存； 长期保存（数月）时，请将流动相置换为含50%以上有机溶剂的溶液； 更久保存（1年左右）时，请使用100%乙腈保存； 色谱柱的保存 * /18 色谱柱的保存 NH2 一个月以内的保存，请使用与所选用流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液（不含酸、无机