HIV筛选试验的原理__培训课件.pptVIP

* 快速旋转法 另一种颗粒凝集法，通常称为快速旋转法。 步骤：与颗粒凝集步骤1-3相似，仅稍作改动。该方法颗粒的浓度减少了十倍，孵育时间明显缩短，微孔板在特制的微孔板离心机上进行中速离心，颗粒经过离心增强了与抗体的凝聚力，缩短了反应时间，然后将平板置于大于70°的斜面上，10-15分钟之后，即可观察结果。 * 有反应的结果在孔的中央出现点状凝集，无反应的结果表现为非凝集颗粒沿斜面分布（见图30），这个方法不是生产商提供的标准方法，但其快速、灵敏和价格廉价的方法，适应血站的大批量筛选应用。 * 图30 * 七、特异性快速法 特异快速法，它既简单又迅速，其将颗粒凝集法的简便性与EIA技术相结合。用于检测HIV抗体,检测HIV抗原的相应方法尚未问世。 * 类型：特异性快速法有许多不同的类型。如金标记法、EIA法，基本类型是将HIV抗原包被于渗透性或半渗透性的膜或板条上，并且以测试单份标本的方式提供给样品和其他反应试剂。大多数特异性快速法都有相应试剂盒。盒内装有所检测试剂。 * ※方法学 1、加入稀释样品，如果标本中存在HIV抗体，就能与包被的HIV抗原结合。 2、孵育其时间较短，通常仅5-10分钟，因为抗原包被于渗透膜上，所以这段时间样品足够穿过膜。 3、洗涤。 * 4、加入预先稀释的连接剂。 注：连接剂的种类： ※酶标抗人IgG ※胶体金标记的SpA 5、肉眼观察最终结果。 特异性快速法优点：很敏感，快速、简便。 * ※总结 1、通过有效的献血者宣教和相关工作促使有输血传染危险的献血者进行自我排除，可以节省进行HIV抗体筛选检测所花费的时间和开支。 * 2、三种筛选试验包括两个基本步骤： ●样品中特异性抗原或抗体的存在是通过与固相抗体或抗原结合，发生标准的免疫学反应形成抗原抗体复合物来证明的。 ●免疫复合物的形成由以后的步骤来检测。（第四章完） * 第三种：夹心型EIA方法学（筛选HIV抗体） 夹心EIA的基本原理与抗球蛋白EIA相同：HIV抗体与固相抗原结合而被检测出。 * 注意在检测抗体的方法上与前两者略有不同，比如酶结合物不同于抗球蛋白型的酶标抗人IgG抗体，也不同于竞争法酶标抗体,而是酶标合成抗原。在孵育过程中，酶结合抗原与已经和固相抗原结合的抗体结合成“夹心”式即抗原——抗体——抗原复合物。这个方法的主要优点是它的特异性，假阳性反应的数量降低。 * 方法学： 1、抗原包被于微孔表面，如前所述(见下图) * 图21 2、加入血清或稀释的血清，孵育(见图21) * 3、洗板后加入酶结合抗原孵育（见图22） 图22 酶结合抗原 * 4、洗板。 5、加底物溶液[见图23]. 图23 酶结合抗原 * 6、孵育后，加终止液终止反应。 7、读取OD值，判断实验结果。 存在HIV抗体的样品孔显色。 * 现在介绍珠法： 珠法与微孔法不同是，抗原包被于聚苯乙烯珠子上，加样品和对照品到多孔塑料反应板孔中，再加各种试剂和珠子到含有样品的孔中，然后在孔内洗珠子，并加其他试剂于孔中，反应发生于珠子表面。至于试剂和一般步骤与微孔法相同。 * 珠法优点：珠子可拿出试管外，可减少干扰，珠子表面积大，大于微孔约5倍。 缺点：用珠法测定需要特殊的仪器设备，这仪器被设计成只能适用于珠子和其反应盘工作，但它的工作方式与微孔法的洗涤仪和读数仪相同。珠子表面抛光程度难一致，使其重复性差。 * 大多数商业性测试手段都是微孔板法，目前唯一被广泛采用的商业化的珠法试剂是由Abbott公司生产的。 * 四、HIV抗原筛选 采用夹心法EIA筛选检测HIV抗原（HIV-Ag）。HIV-抗原和HIV抗体筛选试验区别在于HIV-抗原筛选采用抗体——抗原——抗体夹心，HIV抗体筛选采用抗原——抗体——抗原（酶结合物）夹心。 * 值得注意的是夹心法的包