艾滋病实验室质量管理与控制__培训课件.pptVIP

HIV抗体ELISA检验 质量控制的实践 （一）质控物的制备和保存 质控物的成分应与检测样本的基质相似或相同，为减少基质效应，应尽可能的模拟。 1、内对照和外对照 2、制备 3、保存 4、外部对照质控物的使用 每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的精密度和稳定性，同时可以了解试剂盒的批间或板间差异，并可用于统计质量控制。 5、外部对照质控物的质量要求 质控物的管间或瓶间变异必须小，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。 （二）、质控图的建立及应用 最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，Westgard质控图。 1、质控图参数 平均值、标准差、控制限 质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少于4个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到20批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。(NCCLS)    2、质控规则及使用 实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前许多质控规则已被采用，常用的是12S和13S规则。 质控规则 12S　　　 13S　　随机误差 22S　　系统误差 31S　　系统误差 41S　　系统误差 R4S　　随机误差 7x　　　系统误差　 7T　向上或向下的趋势 8x　　　系统误差 9x　　　系统误差 10x 　　系统误差 （1）告警（12S）：当质控物的测定值超出 +2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：当质控物的测定值超出 +3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差或外部对照滴度下降造成。(随机误差引起的可能性小于０.３％) （3）位移：连续几次（7-10次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。 （4）趋势：连续几次（5-7次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。 质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。 考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。 3、质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。 当质控已计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解决故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。 检验误差类型 1）随机误差：严密监测和控制，使其限制在临床允许的范围之内，并逐步使之缩小。 2）系统误差：要求尽快发现，及时校正。 3）过失误差：尽量消灭。 质量控制的核心问题：在于努力分清误差类型。 图形分析及发现问题 1）曲线漂移： 2）趋势性变化： 3）周期性变化： 失控后处理 失控原因的查找过程并无固定模式，一般原理是由易到难，由近到远地查找． 1）分析原始数据及初步估计失控原因： 2）对检测过程进行回顾分析： 3）选择性复查分析判断失控原因： 4）决定处理方法： 失控后处理失控原因初步查找 　　　　　　　　　　　　示例 初步分析 　　　防止检测失败的最有效的手段是开始实验前仔细核对程序，预先估计程序各步骤。 　　　如试剂使用前要平衡至室温，保证合适的孵育温度和时间，严格按试剂说明书操作等。如果以上都注意到了，但实验仍失败，以下建议可帮助发现问题。 　　a.与技术人员一起复习操作指导书，仔细检查操作步骤中是否有遗漏或改变； 　　b.核查试剂及各组分的失效期； 　　c.核对孵育的温度和时间； 　　d.加样器、洗扳机、酶标仪等是否正常，酶标仪的波长是否准确，加样器和酶标仪是否校准； 　　e.检查蒸馏水的质量； f.检查试剂是否被污染，贮存是否合适。 原始数据分析 　空白对照＼阴性对照＼阳性对照＼标准 　１．一致：无明显系统误差，失控原因在质控血清或该管操作造成的可能性较大． 　　　分析同一瓶质