2013选修3《现代生物科技专题》 知识梳理 更新版.doc

2012选修3《现代生物科技专题》知识梳理 更新版 基因工程 1.1 基因工程的诞生 一、基因工程的诞生 1、20世纪中叶，基础理论取得了重大突破 DNA是遗传物质的证明：1944艾弗里等人 DNA双螺旋结构和中心法则的确立： 1953年沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型。1958年，梅塞尔松和斯塔尔用实验证明了DNA的半保留复制，随后不久确立了中心法则。 遗传密码的破译：1963年，尼伦贝格等破译了遗传密码。 2、技术的发明使基因工程的实施成为可能 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功： 1973年，博耶和科恩将两种不同来源的DNA 分子进行体外重组，并首次实现了在大肠杆菌中的表达，至此，基因工程正式问世。 第一例转基因动物问世： 1980年，科学家首次通过显微注射法，培育出世界上第一个转基因动物。这一实验被认为是基因工程发展史上的一个里程碑。 PCR技术的发明：1985年，科学家莫里斯发明。 二、基因工程的概念 是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。又称重组DNA技术。 思考： （1）基因工程的物质基础是：所有生物的DNA均由四种脱氧核苷酸组成。 （2）基因工程的结构基础是：所有生物的DNA均为双螺旋结构。 （3）一种生物的DNA上的基因之所以能在其他生物体内得以进行相同的表达，是因为它们共用一套遗传密码子。 1.2 基因工程的原理及技术 一、基因工程的工具——酶与载体 1、分子手术刀：限制性核酸内切酶（简称限制酶）。 （1）来源：主要从原核生物中分离和纯化。 （2）特点：每种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子。 （切割的化学键：磷酸二酯键） （2）切割方式 错位切：产生黏性末端。 平切： 产生平末端。 注意：提取目的基因和切割载体使用一般同一种限制酶，目的是能形成相同的黏性末端，形成重组DNA分子。 2、分子针线：DNA连接酶。 （1）类型：E·coliDNA连接酶、T4DNA连接酶等。 （2）作用：可以将两个DNA 片段之间的2缺口通过磷酸二酯键同时连接起来。 3、运载工具：载体。 （1）种类：质粒（常用）、噬菌体、可起载体作用的动植物病毒。 （2）质粒： 来源：是细菌细胞质中一种很小的环状、双链DNA分子。 条件：①具有一个至多个限制酶切割位点。 ②能在受体细胞中自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 ③具有某些标记基因。（供重组DNA的 鉴定和选择） ④能“友好”地“借居”在受体细胞内； 附： 限制酶和DNA连接酶之间的关系图示： 条件 适应性 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于重组DNA的鉴定和选择 1.切割质粒需使用限制酶1次，切割目的基因则需要使用相同的限制酶2次。因为质粒是环状DNA，而目的基因在DNA分子链上。 2.质粒DNA分子上限制酶切割位点的选择必须保证至少有一个标记基因是完整的，如果标记基因全部被切开则不便于鉴定与选择。 3.基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同，基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内，膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。 二、基因工程的一般过程与技术 苏教版 人教版 1、获得目的基因 1、目的基因的获取 2、制备重组DNA分子 2、基因表达载体的构建 3、转化受体细胞 3、将目的基因导入受体细胞 4、筛选出获得目的基因的受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 5、培养受体细胞并诱导目的基因的表达 1、目的基因的获取 （1）目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。 （2）获取方法 从自然界已有物种中分离 人工合成 补充：聚合酶链式反应技术（PCR技术） （1）PCR：即聚合酶链式反应 （2）PCR技术：在体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或序列的技术。 原理：DNA双链复制 （3）方法： 2、基因表达载体的构建（核心） （1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因可以能够表达和发挥作用。 （2）组成：目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因 （3）构建步骤： 用同一种限制酶切割目的基因和载体，从而产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接。 （形成的分子称：重组DNA分子或重组质粒。） 【特别提示】 插入的目的基因只是目的基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的