DxI800培训--DxI原理及定标课件.pptVIP

DxI800原理概述 概述 DxI800是目前世界上最先进，效率最高的全自动化学发光分析仪 用于多种体液微量物质的定量、半定量以及定性试验 采用顺磁性颗粒，碱性磷酸酶激发的AMPPD，RV穿梭系统，试剂盒覆膜技术等 分析技术的关键点 免疫标记物发展 放射性同位素(Radioisotopes) - RIA 优秀的灵敏度，抗干扰能力好 效期短，重现性差，手工操作，分析时间长，污染物的处理等 荧光素(Fluorophores) - FIA 稳定，较好的灵敏度和重现性 其它荧光物的干扰，线性范围窄 酶(Enzymes) - EIA 非常容易使用 对定量分析所要求的灵敏度和宽线性难以实现 化学发光物质 - CLEIA 优秀的灵敏度和宽线性，抗干扰能力好 类型 – 闪烁型(flash)，辉光型(glow) 稳定性依据分子结构会有不同表现 试剂效期 开瓶效期 定标周期 目前常见的免疫分析发光物质 鲁米那：1928年，早期开发的发光标记物 吖啶酯：直接化学发光，闪烁型 吖啶甲酰胺：直接化学发光，闪烁型 三联吡啶钌：电化学发光，闪烁型 AMPPD：酶促化学发光，辉光型 为什么Beckman采用AMPPD 为什么Beckman采用AMPPD 磁微粒子 直径0.08 +/- 0.02 mm ，接触面积大 快速的反应动力学 较少的样品量 提高检测的灵敏度 极好的批内重现性 可以探针取放，实现自动化 有磁性 磁颗粒均匀的悬浮于整个反应体系 分析物在磁颗粒表面捕获 磁颗粒在磁场中被清洗 磁颗粒重新悬浮十分容易 清洗 分析模式 分析模式- 有很多种方式 可定义为分析的 “处方” 设定一个最优化的模式(可变量)去最优化项目的临床应用 分析模式的变化 可变量 夹心法(Sandwich) vs.竞争法(competitive) 标记物的放置 同步(Simultaneous) vs. 分步(sequential) 试剂/样品加入的顺序 孵育的次数(步骤) 清洗分离的次数(步骤) 试剂/样品的体积/浓度 孵育的时间 孵育的温度 DxI800的分析模式 基本分析模式 夹心法(Sandwich) 竞争结合(Competitive binding) 试剂的加入 同步(Simultaneous) (1步, 1次清洗) 分步(Sequential) (2步, 2次清洗) “Piggyback” (2步, 1次清洗) 夹心法分析模式 捕捉抗体(Capture antibody)和标记抗体(labeled antibody) 每个抗体的存在可以与更多的分析物发生反应 分析更可靠,精确,准确和可重现性 分析更灵敏因为所有分析物都参与反应 每个抗体的不同可以针对不同的抗原决定簇，或二个在同一个抗原决定簇 分析更特异因为二个抗体同时反应 适合与检测大分子物质，分子量大有更多的特异性抗原决定簇可选择 一步三明治法 两步三明治法 竞争法分析模式 只有捕捉抗体 主要针对小分子物质检测 没有足够表面积的分析物去符合 “夹心法” 要求 一定量的捕捉抗体使得反应复合物为只是“抽样性” 反应时间较短 一步竞争法 两步竞争法 两步竞争法（标记抗体） 两步竞争法（标记抗体） 竞争法定标 标准品 – 参比物 USP – (United States Pharmacopia) 小分子物质，如，类固醇激素，药物等 质谱分析(mass spectrometry)并标准化 WHO – 世界卫生组织 大分子物质，如，蛋白质/多肽等 标准品(Pool)制备，送近 20 参比实验用免疫学技术进行符值 标准品一直分派到全部用完，后重新制备 1st IRP，2nd IRP，3d IRP 内部(In-house)参比物 定标方式 厂家产生的主定标曲线 感觉节省的校正型 2 点定标 会增加定标的频率 对非线性的标准曲线可能会有问题(大多数的免疫分析产生的是非线性的标准曲线) 多点定标曲线 定量 – 典型的是6个水平, 定性 – 典型的是2个水平 可以达到最大的灵敏度,准确性和精密度 可以有更长的定标周期间隔 DxI800 拟合定标曲线数学模型 加权4参数逻辑曲线（4PLC） 加权拐点平滑样条 加权非拐点平滑样条 直线 速率 定标接受过程 每个定标点重复做2次或更多，获取RLU值 DxI800用前述数学模型拟合数据点 系统尝试通过调整曲线参数，最小化数据点到曲线的距离。 如果尝试次数超过预设仍无法确定曲线，定标失败 如果所有定标测试中有2个或2个以上点有致命旗标，定标也失败 有些测试还要考察S0的CV 系统利用数据点到获得的曲线距离以及曲线的形状，在曲线两侧计算出浓度接受范围 如果任何一个数据点计算浓度超出浓度范围，定标失败 曲线类型一条有效定标曲线总是向上或向下 DxI 800定标分类 定