分子生物学思考题答案.doc

1.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？ 真核生物：①真核基因组庞大。②存在大量的重复序列。③大部分为非编码序列(90％)。④转录产物为单顺反子。⑤是断裂基因，有内含子结构。⑥存在大量的顺式作用元件(启动子、增强子、沉默子)。⑦存在大量的DNA多态性。⑧具有端粒(telomere)结构 原核生物：①基因组很小，大多只有一条染色体，且DNA含量少。 ②主要是单拷贝基因，只有很少数基因〔如rRNA基因〕以多拷贝形式存在。 ③整个染色体DNA几乎全部由功能基因与调控序列所组成； ④几乎每个基因序列都与它所编码的蛋白质序列呈线性对应状态 1.试述基因克隆载体进化过程。 ①pSC101质粒载体，第一个基因克隆载体 ②ColE1质粒载体，松弛型复制控制的多拷贝质粒 ③pBR322质粒载体，具有较小的分子量（4363 bp）。能携带6-8 kb的外源DNA片段，操作较为便利 ④pUC质粒载体，具有更小的分子量和更高的拷贝数 ⑤pGEM-3Z质粒，编码有一个氨苄青霉素抗性基因和一个lacZ基因 ⑥穿梭质粒载体，由人工构建的具有原核和真核两种不同复制起点和选择标记，可在不同的寄主细胞内存活和复制的质粒载体 ⑦pBluescript噬菌粒载体，一类从pUC载体派生而来的噬菌粒载体 2.试述PCR扩增的原理和步骤。对比DNA体内复制的差异。 原理：首先将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸、合适的Mg2+浓度和实验中提供的引物序列合成新生的DNA分子。 步骤：①将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温（94℃）环境下加热1分钟，使双链DNA变性，形成单链模板DNA ②降低反应温度（退火，约50℃），约1分钟，使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上 ③将反应混合物的温度上升到72℃左右保温1-数分钟，在DNA聚合酶的作用下，从引物的3-端加入脱氧核苷三磷酸，并沿着模板分子按5→3方向延伸，合成新生DNA互补链 与体内复制的差别：①PCR不产生冈崎片段②在高温条件下反应，不需要DNA解旋酶③PCR可经过多个循环④在体外进行，可调控 第六章 1.基因敲除 原理：又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点 方法：高等动物基因敲除技术，植物基因敲除技术 2.完全基因敲除和条件型基因敲除 完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动植物个体中的靶基因活性，条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除 3.基因定点突变 原理：通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，用于研究某个（些）氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造DNA调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等 方法：重叠延伸技术和大引物诱变法 第七章 1.乳糖操纵子的正负调控 （—）阻遏蛋白的负调控①当细胞内有诱导物时，诱导物结合阻遏蛋白，此刻聚合酶与启动子形成开放式启动子复合物转录乳糖操纵子结构基因。②当无诱导物时，阻遏蛋白结合与启动子与蛋白质部分重叠不转录。 （=）CAP正调控①当细胞内缺少葡萄糖时ATP→CAMP结合，CRP生成CAP与CAP位点结合，增前RNA聚合酶转录活性。②当有葡萄糖存在时CAMP分解多合成少，CAP不与启动子上的CAP位点结合RNA聚合酶不与操纵区结合无法起始转录结构基因表达下降 2.色氨酸可阻遏、可诱导操纵子 3.真核与原核生物基因转录有哪些差异？ （1）只有一种RNA聚合酶参与所有类型的原核生物基因转录，而真核生物有3种以上的RNA聚合酶来负责不同类型的基因转录，合成不同类型的、在细胞核内有不同定位的RNA （2）转录产物有差别。原核生物的初级转录产物大多数是编码序列，与蛋白质的氨基酸序列呈线性关系；而真核生物的初级转录产物很大，含有内含子序列，成熟的mRNA只占初级转录产物的一小部分 （3）原核生物的初级转录产物几乎不需要剪接加工，就可直接作为成熟的mRNA进一步行使翻译模板的功能；真核生物转录产物需要经过剪接、修饰等转录后加工成熟过程才能成为成熟的mRNA （4）在原核生物细胞中，转录和翻译不仅发生在同一个细胞空间里，而且这两个过程几乎是同步进行的，蛋白质合成往往在mRNA刚开始转录时就被引发了。真核生物mRNA的合成和蛋白质的合成则发生在不同的空间和时间范畴内 7.蛋白质有哪些翻译后的加工修饰？其作用机制和生物学功能是什么？ ①N端fMet或Met的切除 细菌蛋白质氨基端的甲酰基能被脱甲酰化酶水解，不管是原核生物还是真核生物，N端