分子遗传学笔记.doc

分子遗传学绪论 核酸的发现:作为遗传物质所应具备的条件：1多样性：贮存并表达多种遗传信息 2连续性：准确传递后代 3稳定性：物理、化学性质稳定 4多变性：有遗传变化的能力 一、DNA作为遗传物质的证据 肺炎球菌的转化试验 病毒侵染大肠杆菌试验 真核细胞的基因转化 转化：某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。 二、DNA的一级结构 核酸的化学组成：核酸是以核苷酸为基本结构单位，通过3’, 5’-磷酸二酯键形成的链状多聚体。 核苷酸(Nucleotide)：核苷(Nucleoside)，含氮碱基，戊糖；磷酸基团 三、DNA的二级结构 1、DNA双螺旋模型的诞生： Watson Crick建立双螺旋模型，其特征是： 主链：右手双螺旋，脱氧核糖和P为骨架，位于外侧，两条主链反向平行螺旋, 直径￠2nm 碱基配对：位于内侧，嘌呤和嘧啶（A-T,G-C） 螺旋参数：任一条链绕轴一周的升降的距离。3.4nm，10对苷酸，相邻碱基0.34nm。 大沟和小沟：骨架双链在螺旋轴上的间距不等，在DNA表面形成宽窄不等的大小沟。大沟宽2.2nm，是蛋白质识别DNA双螺旋结构上的特定信息位点。小沟宽1.2nm。 3、旋稳定的因素决定双螺： 1、氢键：结构的稳定性与G+C的含量成正比，G-CA-T. 2、碱基堆积力：嘌呤和嘧啶具疏水性,产生疏水区而与介质分开,使碱基与水的接触为最小。 3、其他：带负电荷的磷酸基与介质中的阳离子形成离子键,可有效地屏蔽磷酸基间的静电斥力。 四、DNA物理结构的不均一性 1. 反向重复序列(Inveerted repeats)又称为回文序列（palindrome）,能形成发夹结构或十字形结构2. 富含A+T的序列 3. 嘌呤和嘧啶的排列顺序 碱基组成相同，但排列不同，双螺旋的稳定性有差别5’GC5’CG ， 和碱基堆积力有关，碱基堆聚力是嘌呤向嘧啶方向大于嘧啶向嘌呤方向。 五、DNA二级结构的多形性 DNA可以以多种形式的双螺旋结构存在 1、A-DNA 2、B-DNA 3、Z-DNA 4、其他形式DNA: 三链DNA，四链DNA: 六、DNA的变性与复性 1、基本概念： 下列因素可导致DNA变性：高温 、 酸 、碱 、尿素 、甲酰胺 2、DNA的熔解曲线: 双链DNA 的A260=1.00 （ 浓度为50μg/ml时，对波长260nm紫外线的吸收能力）；单链DNA的A260=1.37； 游离碱基或核苷酸的A260=1.60。 解链温度（melting temperature, Tm）或熔点，Tm是双螺旋失去一半时的温度，即A260的升高达到极大值一半时的温度。是变性温度范围的中点。Tm 时DNA，A260=1.185 Tm值的影响因素： (1) DNA的均一性: 均一性高，Tm值的范围小 (2) G-C含量: G-C含量高，Tm值高 (3) 介质中的离子强度 影响变性的因素：(1) 外部条件 (2) 内部条件：GC含量。马默-多蒂（Marmur-Doty）关系式： Tm = 69.3+0.41(G +C)%，或GC%=（Tm-69.3）×2.44 DNA变性后物理性质发生的变化：（1）流体力学的性质发生改变：粘度下降，而沉降速度增加；（2）提高了对紫外线的吸收能力，此称为增色效应（hyperchromicity）。 3、性反应曲线复－ Cot曲线: DNA复性时单链消失的速度:C/Co=1/1+KCot C：单链DNA浓度 Co：DNA总浓度 t：时间/秒，k：=二级反应常数 复性分数C/Co决定于单链起始浓度和保温时间的乘积（Cot）。定义C/Co=1/2时，Cot值定义为Cot1/2；即复性一半时DNA总浓度和时间乘积1/2=1/1+KCot1/2 1+KCot 1/2=2 k Cot1/2=1总DNA浓度相同时，不同DNA的Cot1/2 值不同 复性动力学公式，复性进行一半时C/C0＝ 1/2＝1/1+KCot1/2 根据复性动力学公式我们可以知到些什么？ (1) 单链浓度随着时间的增大而减小；片断越短， Cot1/2 值越小，(2) 反应速率取决于初始的单链浓度Co；(3) 以反应浓度和COt1/2的对数为座标可绘复性曲线(4) 通过Cot1/2值可测原核生物基因组的大小； (5)不同生物基因组大小不同，复性曲线也不同；可用以区分真核生物和原核生物基因组。DNA复杂性越高，复性越慢， 基因组大复性慢. 基因组的复杂性与其Cot1/2成正比 单一序列和重复序列复性动力学曲线的区别 _ 真核生物的DNA有重复顺序，而原核生物多为单一顺序。(1) 单一顺序的复性曲线常只有一个拐点，而重复顺序常有多个拐点。(2) COt 比值变化范围。原核生物的COt比