微生物实验第一次实验用讲义..doc

实验一 普通光学显微镜的使用 一．实验目的 1. 了解普通光学显微镜的结构、基本原理、维护和保养方法2. 掌握普通光学显微镜的正确使用方法。学习微生物个体形态图画法。 二．实验原理 1. 普通光学显微镜的结构 普通光学显微镜由机械装置和光学系统组成。 图 普通光学显微镜的结构示意图 （1）机械装置（图） 镜座上显微镜的基座，起稳定和支持整个机身的作用，使显微镜能平稳放置在平面上，有的显微镜在镜座内装有照明光源等。 镜柱是连接镜座和镜臂的短柱。 镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时用手握住的部分。直筒显微镜的镜座和镜臂之间有一倾斜关节，可以使镜臂倾斜一定的角度，便于观察。但倾斜度一般不超过45°，避免显微镜失去重心而翻倒。镜筒倾斜式显微镜无此关节。 镜筒是连接目镜与物镜的金属筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相连。根据镜筒的数目，光学显微镜可以分为单筒式和双筒式两类。单筒式又分为直筒式和倾斜式两种；双筒式均为倾斜式。 镜台又被称为载物台，在镜筒下方，是放置标本的地方，为方形或圆形。镜台中央有一圆形通光孔，两侧各有一个用于固定被检标本片的压片夹。有的显微镜则有标本移动器，移动器上装有弹簧夹，可固定标本片。转动螺旋可以使标本片前后和左右移动。有的标本移动器上还带有游标尺，可指明标本所在的位置。 物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜，使用时可通过转动物镜转换器选用合适的物镜。为使用方便，物镜应按从低倍到高倍的顺序安装。转换物镜时，必须用手按住圆盘旋转，切勿用手指直接推动物镜，以免使物镜和转换器间的螺旋松脱而损坏显微镜。 调节器安装在镜臂基部或镜柱两侧的粗、细螺旋上，可调节物镜与被检标本片之间的距离，以便清晰地观察标本。粗调螺旋旋转一周可使镜筒升降约10 mm，一般用于低倍镜调焦；细调螺旋旋转一周可使镜筒升降约0.1 mm的距离，用于高倍镜、油镜或分辨物像清晰度的调焦。 （2）光学部分 物镜安装在物镜转换器上，是显微镜中很重要的光学部件，是由多块透镜组成的一个镜头组。根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，物镜可以被分为低倍镜、高倍镜和油镜三类。低倍镜的放大倍数常为4?、10?、20?；高倍镜的放大倍数常为40?、45?；油镜的放大倍数常为90?、95?、100?，油镜镜筒上刻有OI或HI或oil字样，也有刻一圈红线或黑线为标记的，借以区别于其他物镜。物镜上标出了物镜的重要参数，包括放大倍数、数值孔径（NA）、镜筒高度（单位是mm）及要求盖玻片的厚度等。现举例说明其含义如下（图）： 图显微镜物镜上的重要参数及大致的工作距离 目镜呈短圆筒状，装在显微镜上端。目镜的功能是把物镜放大的物像再次放大。目镜由两片透镜组成，上面一块为接目透镜，下面一块为聚透镜，在两块透镜之间或聚透镜的下方有一视野光阑。在进行显微镜测量时目镜测微尺要放在视野光阑上。目镜上刻有放大倍数，如5?、10?、15?、20?等，可以根据需要选择合适的目镜。 聚光镜又称聚光器，安装在镜台下，由多块透镜组成，其作用是把平行的光线聚焦到标本上，增强亮度。一般在镜柱一侧有一旋纽，可使聚光镜升降。聚光镜与物镜配合使用，通常用低倍镜时聚光镜应下降，而当使用油镜时聚光镜应升到最高位置。 在聚光镜的上方是虹彩光阑，俗称光圈。光圈由十几张金属游片组成，通过调节光阑孔径的大小，可以调节进入物镜的光线的强弱。在观察较透明的标本时，光圈宜小一些，这时分辨率虽然降低，但反差增强，从而使透明的标本看得更清楚；但不宜将光圈关得太小，以免由于光干涉现象而导致成像模糊。当使用油镜时，把光圈完全打开，增强射入光线的强度。在光圈下常装有滤光片架，可以放置不同颜色的滤光片。 在聚光镜下方的镜座上，安装有反光镜。反光镜是一个有平、凹两个面的双面镜，可以在水平与垂直两个方向上任意旋转，其作用是采集光线并将光线射向聚光镜。凹面镜还能起到聚光的作用。因此，未安装聚光镜的显微镜及光源较弱时可应用凹面镜，而在光源较强及用聚光镜时一般可用平面镜。有的显微镜安装有电光源，使用时不用通过反光镜就可以进行观察。 2. 普通光学显微镜的光学原理 由单透镜构成的放大镜和由几块透镜组成的实体显微镜称单式显微镜。现代普通光学显微镜是利用两组透镜系统来放大成像，故又被称为复式显微镜。其光学原理是：由外界入射的光线经反光镜反射向上，或由内光源发射的光线经聚光镜向上汇聚在被检标本上，由标本反射或折射出的光线经物镜进入，使光轴与水平面倾斜45?角的棱镜在目镜的视场光阑处，成放大的侧光实像，该实像再经目镜的接目透镜放大成虚像。 （1）显微镜的放大倍数 被检标本经显微镜的物镜和目镜放大后的总放大倍数是：标本放大倍数＝物镜的放大倍数?目镜的放大倍数。如：用40?的物镜和10?的目镜，总放大倍数是400