唐山师范学院综合性,设计性实验项目申报表..docVIP

唐山师范学院综合性、设计性实验项目申报表 申报单位名称： 生命科学系 2007 年 月 日 实验项 目名称 唾液淀粉酶活性分析 实验项目性质 √□综合性 □设计性 所属课程 生物化学实验 开设学期 第 3 学期 综合/设计性实验学时数 5 实验室 名称 生物化学及植物生理学实验室 地点 5401 每组人数 4 项目负 责人 李春香 联系 电话 经费预算（元） 500 详细说明该实验涉及哪些知识点 唾液淀粉酶的制备 环境条件对唾液淀粉酶活性的影响 唾液淀粉酶的专一性 唾液淀粉酶活性的测定 参加实验指导人员 李春香、张淑红、高凤菊 实验项目建设进度安排 2007年6月：申报实验项目 2007年6月－2007年9月：准备试验材料及仪器，完善各项准备工作 2007年10月：首次开设试验项目，进行效果分析 主要仪 器设备 分光光度计 恒温水浴锅 电炉 实验内容及拟达到的培养目标 实验内容：学生自制唾液淀粉酶，分析影响唾液淀粉酶活性的环境条件，并在得出的最适条件下测定唾液淀粉酶的活性。 培养目标：通过实验内容的学习，使学生从整体掌握酶学的基本知识以及测定酶活性的基本思路和方法；通过实验结果的分析，培养学生独立分析问题的能力。 系论证 意见 系主任签名： （盖章） 年 月 日 主管部门 意见 （盖章） 年 月 日 综合性、设计性实验项目指导书 《生物化学实验》 实验项目：唾液淀粉酶活性分析 张淑红 编 写 适用专业： 生物科学 生物技术 唐山师范学院生命科学系 2007年5月 实验学时：5学时 实验类型：综合性 每组人数： 5 人／组 一、实验目的 1、通过本实验的学习，使学生掌握酶学的基本知识，特别是唾液淀粉酶酶活性的测定方法。 2、通过实验结果的分析，培养学生独立分析问题的能力，为今后的学习和科研工作奠定基础。 二、实验原理 1、影响酶促反应的因素 淀粉受唾液淀粉酶的作用水解成麦芽糖和少量葡萄糖。通常以测定淀粉水解的程度（底物减少）或麦芽糖生成的数量（产物增加）来衡量淀粉酶的活性。淀粉经淀粉酶水解后得到分子大小不相同的糊精，糊精遇碘生成不同的颜色。随着糊精分子量的降低依次为蓝色、紫色、暗褐色或红色、无色。 酶的活性受温度的双重影响。低温时酶活性表现较低，在一定范围内，酶活性随温度上升而增高。通常每升高10℃，反应速度增加一倍左右；另一方面，温度越高使酶蛋白变性越快，致使酶活性随温度上升而降低，以致完全丧失活性。当酶促反应速度达到最大值时的温度，称为酶作用的最适温度。本实验以唾液淀粉酶对淀粉的水解作用为例，观察0℃、37℃和100℃ 三种温度对酶活性的影响。实验中各管除温度外，其它反应条件皆相同。唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精及麦芽糖。它们遇碘呈现不同的颜色反应，故可利用碘反应的颜色对比来判定不同温度下酶活性的大小。 酶的活性受环境pH的影响极为显著。因pH影响酶蛋白和底物的解离状态，从而明显改变酶与底物的结合和催化作用。每一种酶在一定的条件下都有它发挥作用的最适pH，此时酶的活性最大。当其它条件相同时，离最适pH越近，其活性越大，即所催化的反应速度越快。本实验利用唾液淀粉酶对淀粉的水解作用，在其它条件相同时，对比观察pH变化对酶活性的影响，用碘反应判断结果。 另外激活剂和抑制剂对酶活也具有一定的影响，能增高酶活性的物质称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。 2、酶作用的专一性 麦芽糖和葡萄糖都具有还原性，能使班氏试剂中的二价铜离子（Cu2+）还原成一价铜离子（Cu+）生成砖红色的氧化亚铜沉淀。而蔗糖不能被水解也不具有还原性，故不能被班氏试剂还原。利用此性质可以检测唾液淀粉酶的专一性。 3、酶活性的测定 酶活力也称酶活性，是以在最适温度、最适pH等条件下，催化一定的化学反应的初速度来表示。本实验是以一定量的唾液淀粉酶液在实验得出的最佳条件下，在一定的初始时间里将淀粉还原为还原糖，然后通过与DNS试剂作用，比色测定，求得还原糖的生成量，从而计算出酶反应的初速度，即酶的活力。这里规定，在最佳实验条件下每分钟水解淀粉生成1mg还原糖作为一个淀粉酶活力单位，记为1U。 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 三、实验方案 （一）唾液淀粉酶的制备 1、每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。 2、先