人教版本生物选修一课题2《多聚酶链式反应扩增DNA片段》学案.docVIP

09-10学年高明区纪念中学 高二 级 生物 科学案 执笔：钟日文 审核： 备课组长签名： 课 题（理） 课型 课时 讲学时间 班级 姓 名 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 新课 2 8月 日 【学习目标】 1、了解PCR技术的基本操作 2、理解PCR的原理 3、讨论PCR的应用 【重难点】 PCR的原理和PCR的基本操作 【复习】DNA的粗提取和鉴定 完成下列实验步骤： 【基础知识】阅读课本P58－63，完成下列空格 1．PCR原理：回忆DNA的复制过程，填写下列表格 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 合成子链的原料 DNA聚合酶 引物 DNA的两条链是　　　　　　　　　　　的，通常将DNA的羟基末端称为 ，而磷酸基团的末端称为 。DNA聚合酶不能 开始合成DNA，而只能 ，因此，DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是 。 在DNA的复制过程中，复制的前提是 。在体外可通过控制 来实现。在 的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为 。PCR利用了DNA的 原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来 的DNA聚合酶的发现和应用，大大增加了PCR的效率。 PCR反应需要在一定的缓冲溶液中提供： ， ， ， ，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 2．PCR的反应过程 PCR一般要经历 循环，每次循环可以分为 、 和 三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由 延伸而成的DNA单链会与 结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能 ，使这段固定长度的序列成指数扩增。 PCR的反应过程 变性：在 ℃时DNA解旋 复性：在 ℃时引物与DNA单链结合 延伸：在 ℃时合成DNA子链（两个引物间的序列） 3．实验操作 在实验室中，做PCR通常使用 ，它是一种薄壁塑料管。具体操作时，用微量移液器，按PCR反应体系的配方在 中依次加入各组分，再参照课本P62表的设置设计好PCR仪的循环程序即可。 ［思考］缓冲液相当细胞内的什么成分？　　　　　　　　　 4．操作提示 为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的 、 、 以及蒸馏水等在使用前必须进行 。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在 储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。在微量离心管中添加反应成分时，移液管上的枪头要 。 [疑难点拨] 1.PCR技术简介 PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题，被广泛的应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等各方面。 2．细胞内参与DNA复制的各种组成成分及其作用 ①解旋酶：打开DNA双链 ②DNA母链：提供DNA复制的模板 ③4种脱氧核苷酸：合成子链的原料 ④DNA聚合酶：催化合成DNA子链 ⑤引物：使DNA聚合酶能够从引物的3，端开始连接脱氧核苷酸（引物是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20—30个核苷酸） 3．DNA的合成方向 DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3，端，而磷酸基团的末端称为5，端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3，端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA