新·第10章 吸光光度-精.pptVIP

特点： 10.1.2 光的吸收基本定律 ─朗伯-比耳（Larnbert-Beer）定律 朗伯—比耳定律数学表达式 透射比T 摩尔吸收系数ε的讨论 摩尔吸收系数ε的讨论 2. 单色器 3. 样品室 4. 检测系统 (2)光电二极管阵列 10.2.2 吸收光谱 1.吸收曲线的讨论 2 .参比溶液的选择 2 显色剂 物理性因素： 非单色光作为入射光引起的偏离： 讨论： 讨论： 讨论： 3.由溶液本身化学反应引起的偏离 (化学性因素）  a.解离 b.络合 c.缔合 最佳读数范围与最佳值: 示差法为什么能较准确地测定高浓度组分呢？ 10.6 吸光光度法的应用 10.6.1 痕量金属的分析 根据待测金属离子，（1）选择适当的显色剂，（2）控制 显色条件，（3）确定测定波长和恰当的测定条件，（4）利用 标准曲线，对金属离子进行定量分析。 10.6.2 临床分析 （1）试样+载片(不同层有分析所需试剂)→出现特征颜色。 （2）半定量：试纸。 10.6.3 食品分析 待测食品样品+生物试剂→特征颜色，比色分析。 1.酸碱离解常数的测定 10.3.2 影响显色反应的因素 1.酸度: a.对显色剂的平衡浓度及颜色的影响； b.影响被测金属离子的存在状态； c.影响络合物的组成； 2.显色剂用量 吸光度A与显色剂用量cR的关系会出现如图所示的几种情况。选择曲线变化平坦处。 3.显色时间：实验确定 4.显色温度：实验确定 5.溶剂 10.4 吸光光度分析及误差控制 10.4.1 测定波长的选择和标准曲线的制作 1.测定波长的选择 一般应该选择λmax为入射光波长。 如果λmax处有共存组分干扰时， 则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干 扰的入射光波长。 如图测定A，有B共存干扰，选500nm 为测定波长，灵敏度虽有所下降，却消除 了干扰，提高了测定的准确度和选择性。 测量波长的选择: “吸收最大，干扰最小”原则 2. 标准曲线的制作 （1）根据A=εbc配制一系列不同浓度的标准溶液; （2）显色; （3）在选定的波长条件下; （4）选择合适的参比溶液; （5）测定吸光度， （6）以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标， （7）绘制通过原点的标准曲线。 现象 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。 引起偏离的因素（两大类） （1）物理性因素， 即仪器的非理想引起的； （2）化学性因素。 10.4.2 对朗伯-比尔定律的偏离 1.非单色光引起的偏离 难以获得真正的纯单色光。 分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。 假设由波长为λ1和λ2的两单色光 组成的入射光通过浓度为c的溶液，则： A1＝lg（Ｉ01 /Ｉt1 ）＝ ε1 bc A2＝lg(Ｉ02 /Ｉt2 ）＝ ε2 bc 故： 式中：Ｉ01、Ｉ02分别为λ1、λ2 的入射光强度； Ｉt1 、Ｉt2分别为λ1、λ2 的透射光强度； ε1、 ε2分别为λ1、λ2的摩尔吸收系数； A总 = lg（Ｉ0总/Ｉt总 ) = lg[(I01 +Ｉ02)/(Ｉt1 +Ｉt2 ）] = lg[(I01 +Ｉo2)/(Ｉ01 10 -ε1bc +Ｉ02 10 -ε2bc ）] 令： ε1 - ε2 = ?ε ； 设： Ｉ01 =Ｉ02 A总 = lg(2I01)/Ｉt1(1 +10 - ?εbc ） = A 1 + lg2 - lg(1 +10 - ?εbc ) 因实际上只能测总吸光度A总，故 A总 =A1 + lg2 - lg(1＋10－?εbc ) (1) ?? = 0； 即： ε1= ε 2 = ε 则： A总 ＝lg（Ｉo /Ｉt）＝ εbc (2) ? ε ≠0 若 ? ε 0 ；即ε 2 ε 1 ； － ? εbc0, l