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分光光度法 云南先锋化工有限公司质量监测中心 1、分光光度法引言 （1）概念：分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。（是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。） （2）阐述概念：在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。 （3）特点：灵敏度高、精确度高、操作简便、快速。对于复杂的组分系统，无须分离即可检测出其中所含的微量组分的特点。 （4）波长范围(1)200～400nm的紫外光区，(2)400～760nm的可见光区，(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm-1～400cm-1)的红外光区。  2、分光光度法的原理 Lambert定律：一束单色光在通过透明溶液时，由于溶液吸收一部分光能，使光的强度减弱，若溶液浓度不变，则溶液的厚度越大，光线强度的减弱也越显著，即光吸收的量与溶液的厚度成比例关系。若以I0表示入射光强度，I表示透过光强度，L表示溶液的厚度，而I/ I0表示光线透过溶液的程度，称为透光率，用T表示，则T= I/ I0。K为消光系数，在入射波长、溶液种类和温度一定的条件下，K是一个定值。 Beer定律：一束单色光在通过透明溶液时，若溶液的厚度不变，则溶液浓度愈高，光线强度的减弱也愈显著，即溶液对光的吸收与溶液的浓度成比例关系。 分光光度法的原理 Lambert-Beer（朗伯比尔）定律：如果同时考虑液层厚度和溶液浓度对光吸收的影响，将Lambert和Beer定律合并，描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系。 A=kcl 3、如何求被测组分的含量 (1).利用标准管计算测定物的含量 在相同条件下测定已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS），同时也测定末知浓度（CU）的吸光度（AU）， (2)利用标准曲线计算测定物含量 先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测出它们的吸光度。然后以各管吸光度（A）为纵坐标，各管的浓度（C）为横坐标，在方格坐标纸上作图。 若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律，则必然得到一条通过原点的直线，即标准曲线，亦称工作曲线。以后对未知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度。 在一定条件下，工作曲线是一条直线，直线的斜率和截距可以用最小二乘法求得。Y=a+bx 工作曲线应定期校准。当条件有变动时，例如仪器经过修理、更换光源、更换标准溶液、试剂重新配，都应重新制作工作曲线。 4、应用实例： 4.1中控分析：废水中甲醇含量的测定；生化废水中CODcr （催化快速法）、 NH3-N（纳氏试剂比色法）、 C6H5OH（4-氨基安替吡啉光度法）；液氧、液空中油含量的测定； 4.2原材料分析：煤焦灰成分分析中二氧化硅的测定（硅钼黄光度法）；二氧化钛的测定； 4.3水质环境监测分析： 4.3.1水质分析：SiO2 、 PO43- 、 Fe、余Cl2、NH4+、NO2- NO3- 、浊度、Cu、水质色度的测定； 4.3.2环境监测站：1#、3#排口CODcr （催化快速法）、 NH3-N（纳氏试剂比色法）、 C6H5OH（4-氨基安替吡啉光度法）；硫化物测定（亚甲基蓝分光光度法）；石油类（红外分光光度法）；砷含量的测定 （ 二乙氨基二硫代甲酸银光度法）；氟化物的测定 （ 氟试剂分光光度法）； 4-氨基安替吡啉光度法1 测定原理 挥发酚类化合物于pH=10.00±0.20介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚安替比林染料，其水溶液在510nm波长处有最大吸收。用分光光度法测其含量。本法适用于含酚浓度为0.002mg/L～6mg/L的含酚废水。 2 试剂、材料 2.1硫酸溶液：1+3溶液； 2.2磷酸溶液：1+9溶液； 2.3 4-氨基安替比林溶液20g/L: 称取2g4-氨基安替比林(C11H13N3O)溶于水中稀释至100mL 置冰箱中保存,可使用一星期； 2.4 铁氰化钾溶液80g/L：称取8g铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])溶于水稀释至100mL 置冰箱中保存可使用一星期； 2.5 硫酸铜溶液：100g/L