9糖化酶活力测定导论.pptVIP

第九章 糖化酶活力的测定 概 述 糖化型淀粉酶（一类酶）：将淀粉水解成麦芽糖或葡萄糖，包括以下几种： β-淀粉酶： 淀粉-β-1，4-麦芽糖苷酶 异淀粉酶： 淀粉-1，6-葡萄糖苷酶（真菌淀粉酶） 糖化酶： 淀粉-α-1，4-葡萄糖糖苷酶 概 述 糖化酶是由曲霉优良菌种（Aspergilusniger）经深层发酵提炼而成。糖化酶，又称葡萄糖淀粉酶，它能把淀粉从非还原性未端水解α-1.4葡萄糖苷键产生葡萄糖，也能缓慢水解α-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖。 本产品广泛用： 生产白酒、黄酒、酒精、啤酒；用于以葡萄糖作发酵培养基的各种抗生素、有机酸、氨基酸、维生素的发酵； 生产各种规格的葡萄糖。 总之，凡对淀粉、糊精必需进行酶水解的工业上，都可适用。 目 的 学习糖化型淀粉酶（或液体曲酶）活力的测定方法 了解糖化型淀粉酶活力大小对工艺生产的指导意义 一、原 理 α-1，4-糖化酶：催化淀粉水解，从淀粉分子非还原性末端开始，分解α-1，4-糖苷键生成葡萄糖，反应生成的葡萄糖用碘量法定量测定，以表示糖化性淀粉酶的活力。还能缓慢水解α-1，6-葡萄糖苷键，生成葡萄糖。 酶活力单位：1mL液体酶（或1g固体酶）在40度、PH4.6条件下，1h降解可溶性淀粉每产生1mg葡萄糖，即为一个酶活力单位。 在用Na2S2O3硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。 碘量法反应（淀粉经糖化酶水解生成葡萄糖，葡萄糖具有还原性，其羰基易被弱氧化剂次碘酸盐所氧化）： I2+2NaOH→NaIO+NaI+H2O NaIO（过量）+ CH2OH(CHOH)4CHO CH2OH(CHOH)4COOH + NaI 过量的NaIO酸化后析出碘（I2），用硫代硫酸钠标准溶液滴定过量的碘，则可计算出酶的活力。 I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI 二、仪器和试剂 1.仪器 具塞比色管、碱式滴定管、恒温水浴锅、分析天平、电子秒表、酸度计。 2.试剂 （1）0.2mol/L pH4.6醋酸钠缓冲液 称取醋酸钠(CH3COONa·3H2O)2.8g，用蒸馏水溶解，定容至100m1。冰醋酸(CH3COOH)2.9mL，定容至1000mL。分别取醋酸钠49ml和醋酸51ml混匀。缓冲液以酸度计或精密试纸校正pH。 （2） C（Na2S2O3）=0.05mol/L 硫代硫酸钠标准滴定溶液 配制： 称取结晶硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)13g和碳酸钠0.1g（硫代硫酸钠溶液在pH9-10时最稳定）溶于煮沸后冷却的蒸馏水中（无CO2），定容至1000mL，即得0.1 mol/L硫代硫酸钠溶液。贮于棕色瓶中密封保存，配制后应放置一星期标定使用。 标定： （p38）准确称取基准物K2Cr2 O7 0.05g，置500 mL容量瓶中，加水25 mL溶解，加1g KI 和 10mL c（1/2H2SO4）= 2mol/L 硫酸溶液，KI溶解后，暗处静置10min，加水150mL，用配好的硫代硫酸钠溶液滴定，加3mL 0.2%淀粉指示剂，滴定到溶液又蓝色变为亮绿色为终点，体积V1mL。同时做空白试验，体积V2 mL。 计算： m（基准物质量，g） C（Na2S2O3）= （V1-V2）×0.04903 0.04903：与1mL Na2S2O3标准溶液相当的中铬酸钾的质量，g。 （3）C(1/2 I2)=0.1mol/L标准滴定碘液 配制：称取碘化钾36g和碘13g溶解在100m1蒸馏水中，定容至 1000ml贮存于 棕色瓶中。 标定： 已经标定的C（Na2S2O3）=0.05mol/L 硫代硫酸钠标准滴定至蓝色消 失，淀粉做指示剂。 计算：p39 （4）0.1mo1/L氢氧化钠溶液 （5）20%氢氧化钠溶液 称取4g氢氧化钠加蒸馏水溶解，定容至1000ml。 （6） c（1/2H2SO4）= 2mol/L 硫酸溶液 量取浓硫酸5.6ml，慢慢加入于80 m1蒸馏