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苦?瓜?粗?多?糖?提?取?物?降?血?糖?作?用?的?实?验?研?究 七班第七组 张杰 李江涛 　 　孙宇超　高佳 实验背景 　　苦瓜，又名凉瓜，为葫芦科苦瓜属植物，果实药食兼用，具有清热解毒明目、滋补强壮等功效。近年来苦瓜的药用价值引起了研究者的高度关注。苦瓜含有苦瓜甙（苦瓜果实中特有的苷类，能够有效的控制血糖。其是β-谷甾醇-β-D-葡萄糖甙（β-Sitosterol-β-D-glucoside）和5，25-豆甾二烯醇-3-葡萄糖甙(5，25-Stigmastadien-3β-ol-β-D-glucoside）的等分子混合物。）、苦味素（一类具苦味化合物的通称，在中草药成分中主要指除了生物碱、甙类以外具有苦味性质的物质。）、苦瓜蛋白等生物活性成分，无论民间或是药理研究均证明苦瓜具有良好的降血糖作用。 实验目的 　　本研究观察了苦瓜粗多糖提取物对正常小鼠糖耐量及实验性糖尿病和遗传性糖尿病小鼠血糖的调节作用。 实验材料 １.苦瓜粗多糖　取市售新鲜成熟苦瓜，洗净去瓤，粉碎后，按文献报告提取多糖方法经改进后提取苦瓜多糖，经真空冷冻干燥得粗多糖样品，经硫酸_苯酚方法（利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。）测定，多糖含量为８８％。实验前用蒸馏水配制成混悬液。 ２.昆明种小鼠，雄性，体重18~22ｇ，自由摄食、饮水。所用饲料为标准鼠饲料，能量密度为15.2ｋＪ/g（能量百分比分别为蛋白23.1%，脂肪16.%，碳水化合物60.4%）。 3.KKAy小鼠，即遗传性糖尿病动物模型，表现为2型糖尿病特征，雄性，体重（30±2）g，血糖筛选标准空腹4h，血糖＞8.0mmol/l。 实验药品及仪器 实验药品： 四氧嘧啶【注①】 实验仪器：血糖测试仪及专用试纸 注①：（2,4,5,6-嘧啶四酮）是嘧啶的一种含氧衍生物。在水溶液中以水合物形式存在。四氧嘧啶是最早被命名的有机化合物之一。它最早由意大利化学家Luigi V. Brugnatelli在1818年分离。常用于糖尿病小鼠的造模。 实验性糖尿病小鼠模型制备 　采用正常昆明小鼠，用pH4.5 0.5mol/l柠檬酸溶液配制四氧嘧啶，按200mg/kg bw 腹腔注射，破坏小鼠胰腺β细胞，注射4h后给予10%葡萄糖溶液灌胃，以避免动物由于持续低血糖引起惊厥死亡，72h后测量空腹4h的血糖，血糖＞10mmol/l的动物用于实验。模型动物具备实验性糖尿病特征 实验设计 1.CPS对正常小鼠口服葡萄糖耐量（OGTT）的影响：正常小鼠24只，随机平均分成实验组和对照组，空腹12h，一次性经口给予葡萄糖3g/kg bw，实验组同时一次性经口给予CPS1g/kg bw，测定给药后0.5h、1h、2h血糖。 2.CPS对随机进食情况下1、2型糖尿病小鼠血糖的影响：2种糖尿病小鼠各20只，均随机平分成实验组和对照组，实验组一次性经口给予CPS1g/kg bw，同时撒饲料，测定给药后2h、4h血糖。 3.CPS对1、2型糖尿病小鼠空腹血糖的影响：2种糖尿病小鼠各20只，均随机平分成实验组和对照组，实验前动物禁食4h，实验组一次性经口给予CPS1g/kg bw，分别测定给药后2h、4h血糖。以上各实验对照组均给予等体积的生理盐水，其余操作与实验组相同。 观察指标 血糖测定 取动物尾静脉血用葡萄糖氧化酶法【注②】，仪器为血糖测试仪及专用试纸 注②：gop-pod法即葡萄糖氧化酶法，可以用来测测定血清（浆）葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 预期实验结果 预期结果为CPS能显著改善正常小鼠葡萄糖耐量，CPS对1、2型糖尿病小鼠空腹血糖有显著降低作用。 实验分析与讨论 糖尿病并发症多、致残率高的特点，决定了其高昂的治疗成本。目前，尚无治愈糖尿病的有效方法，因此控制患者血糖水平，预防并发症的发生是治疗糖尿病的关键。由于这是一个长期的过程，故应用植物中的天然降糖物质与应用合成药物相比，具有易于接受和坚持及毒副作用小的优点。现代研究常选择用四氧嘧啶致实验性糖尿病小鼠（一种特异性β细胞毒剂，可选择性地破坏胰腺β细胞引起实验性糖尿病），主要表现为胰岛素缺乏。KKAy小鼠是具遗传倾向的典型2型糖尿病动物模型，主要表现为胰岛素抵抗。 实验分析与讨论