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第三章 植物离体快繁技术 第一节 离体快繁的方法 一、植物的离体快速无性繁殖 1、概念 利用离体培养技术,将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织或细胞进行离体培养,在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。 2、特点: 繁殖速度快、数量大; 培养条件可控 占地小 管理方便,利于自动化 便于种质保存和交换 组织培养与植物快速无性繁殖 无性繁殖:扦插、嫁接、压条、分离繁殖、组织培养 有性繁殖:种子繁殖 兰花工业:欧洲兰花的工厂化生产 荷兰的球根花卉:郁金香、洋水仙、小苍兰,能够准确控制开花期,运往世界各地。 芦笋 石刁柏 百合科植物石刁柏Asparagus officinalis L. 的块根 化学成分 含皂甙,其皂甙元为美洲菝葜皂甙元 润肺镇咳,祛痰杀虫 芦笋是指石刁柏的嫩茎,因其嫩茎形似芦苇的嫩茎和竹笋,故称芦笋 芦笋雌雄异株,是一种多年生宿根性草本植物,以食其嫩茎为主 芦笋 它是一种极好的保健蔬菜,为二十一世纪的“蔬菜之王”“蔬菜中的贵族菜”。 芦笋营养丰富,香肥、脆嫩,视感极佳,并带有特殊的芳香味。 具有人体所必需的多种氨基酸,含量比例也比较适当,无机盐元素中有较多的硒、钼、镁、锰、铬等微量元素,它们对防治癌症及心脏病有重要的作用 还含有大量的天门冬酰胺为主体的非蛋白质含氮物质和天门冬胺酸以及多种甾体、皂甙、芦酊、甘露聚糖、胆碱等,对心脏病、高血压、心率过速、疲劳症、水肿、膀胱炎、排尿困难等病症有一定的疗效。 含有天门冬酰胺酶,能治疗白血病. 芦笋繁殖 芦笋为雌雄异株植物,在自然群体中,其单株之间的遗传组成极为复杂,由于长期异交,种性退化十分严重,所以通过种子繁殖不能保持品种的优良性状。 分株无性繁殖速度慢,繁殖系数低,成为其产业化进程中的限制因素。 目前,我国尚不能生产芦笋的种子,生产用种一直靠国外进口。随着芦笋品种的更新,今后尚需不断进口种子,不仅消耗大量外汇,而且种子纯度差,直接影响其产量和品质。 3、离体快繁的程序和技术关键 培养物的建立 茎芽的增殖 完整植株的形成 再生植株的锻炼和移植 (1)无菌外植体的制备方法 概念:在无菌条件下,用于试管内继代增殖的植物材料,称为无菌外植体或繁殖外植体。 制备方法:田间取回嫩枝、消毒、接种、形成丛芽 技术关键: 材料的灭菌:杀菌、材料成活 培养基的筛选:考虑植物种类、外植体类型、成苗途径 步骤 1.入:将预备接种的培养基、菌种、接种用具及消毒用品全部放入接种箱,封闭接种箱 2.擦:接种前用75%的酒精棉球擦手,然后伸进接种箱复擦一次,特别是手指夹内,并擦拭所有用具。3.烧:用酒精灯火焰外焰烧灼接种器具,待其冷却待用。 4.喷:双手伸进接种箱,用已装好3%来苏水或5%石碳酸的小喷雾器喷雾,沉降粉尘,净化接种箱。 5.薰:将称量好的高锰酸钾倒入甲醛溶液中产生蒸汽薰蒸,消毒30分钟,杀死箱内杂菌,其比例为高锰酸钾5g/m3,加10ml甲醛溶液。6.照:用紫外线灯照射15-30分钟 7.轻:接种时轻拿轻放8.除:指将无关物品全部清除出接种箱。 (2)不定芽的增殖 不定芽型:抑制顶端优势,促进腋芽生长。 顶芽和腋芽萌发途径 胚状体途径:形成胚状体后成苗。特点:繁殖率高,遗传性稳定 原球茎途径:兰属特有;种子、原球茎、植株 不定芽型容易成苗,对培养基要求不高,后代遗传性稳定;但取材受限制。 胚状体发生型对培养基要求高,但遗传性稳定 切割 调节激素种类和配比 外源激素的积累,过量会造成畸形芽、透明芽,影响不定芽的质量,因此应适时降低激素的浓度。 (3)完整小植株的形成 诱导根分化的技术关键: 调节激素种类和浓度:提高生长素相对浓度、降低细胞分裂素的浓度、无激素 调节基本培养基的营养组成:1/2或1/4MS 适当降低渗透压:根分化低于芽分化的渗透压 添加活性碳:造成黑暗的环境 培养基内诱导 基质生根法:糠灰、蛭石、珍珠岩、沙 嫁接生根法:无籽西瓜嫁接在瓠子上长根 滤纸桥瓶外生根技术 1、实验条件 在温室内搭建塑料拱棚,长2m,宽1m,在薄膜上面加上微喷设施,以便调节温度,在拱棚的一侧设有加湿器的通道,允许湿雾进入棚内,并根据光强在拱棚上搭遮阴网。 2、操作过程 取材:在组培室中剪取1.5-2.0cm长的带顶芽的茎段,余下部分可作继代扩繁培养。 生长素处理:所剪取茎段的基部在一定浓度的生长素蘸过后,轻轻插入滤纸桥中,放入棚内有一定营养液的的长方形容器内,然后启动调控措施。 保养:在操作过程当中,要对茎段不时的喷水雾以防止失水过多而萎蔫,通过观察茎段的生根情况,并根据所出现的情况及时调整光强,温度、湿度,筛选出最佳的生根条件。 (4)小植株的驯化和移栽 日光锻炼,恢复叶绿体光合作用 湿度锻炼,打开培养瓶1~2周 冲洗干净培养基 选择基质 保湿
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