临床分子生物学技术绪论剖析.pptVIP

* * 医学检验系 李子博 临床分子生物学检验技术 绪 论 第一节　临床分子生物学检验技术的发展 一、什么是临床分子生物学技术 临床分子生物学=分子生物学+临床医学检验 什么是分子生物学？ 分子生物学是以核酸和蛋白质等生物大分子的结构、功能及其在信号传递中的作用为研究对象，在分子水平研究生命现象及其规律的一门学科。 Cell Nucleus Chromosome Protein Gene (DNA) Gene (mRNA), single strand “第一代诊断技术” ——早期的细胞学检查 “第二代诊断技术” ——生化指标分析（20世纪50年代） “第三代诊断技术” ——免疫学诊断（20世纪60年代） “第四代诊断技术” ——临床分子生物学诊断（20世纪70年代末） 临 床 诊 断 技 术 的 发 展 临床分子生物学检验技术的发展 前三代技术 · 以疾病的表型改变为依据 · 非特异性、滞后 · 难以早期诊断 分子诊断 · 以疾病基因及表型为探测 对象 · 特异、敏感 · 早期诊断、预测 窗口期： HBV 56天（缩短6-15天） HCV 70天（缩短41-60天） HIV 22天（缩短10-15天） 1、寻找分子生物学检验标志物。 2、建立实用、可靠的检测技术方法。 进行方法学评价和临床意义评价 3、建立分子生物学检验技术的 质量控制和质量管理。 临床分子生物学检验技术的主要任务 1978年，KanYuet-Wai首次应用液相DNA分子杂交技术成功的进行镰状细胞贫血的产前基因诊断，标志着检验诊断进入基因诊断时代。 二、临床分子生物学检验技术的发展 第一阶段：以DNA分子杂交技术为基础的诊断方法。 -开展遗传病的基因诊断 简悦威（美国科学院院士）：1936年生于香港，1958年毕业于香港大学医学院，并于1980年取得香港大学理学博士学位。他于1972年前往加州大学旧金山分校工作，現为该校罗氏达蒙教授。 Kan Yuet-Wai Yuet Wai Kan and Andree M. Dozy. Polymorphism of DNA Sequence Adjacent to Human ? -globin Structural Gene: Relationship to Sickle Mutation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1978,75：5631- 5635. 第三阶段：以生物芯片技术为代表的高通量密集型 检测技术。 -开展多基因多因素疾病的基因诊断 第二阶段：以PCR技术为基础的诊断方法。 -开展获得性基因病（病原微生物）的基因诊断 第四阶段：以DNA测序技术和生物质谱技术为代表的 检测技术。 第二节 临床分子生物学检验技术应用 基因组DNA是目前最常用的分子靶标 DHPLC技术 一、病原生物基因组 1.菌种鉴定：测序和探针杂交鉴定结核杆菌。 2.确定病毒感染和病毒载量： 3.病毒分析： 4.细菌耐药性检测和分子流行病学调查： 二、基因变异 1.致病基因的分子缺陷：单基因致病基因检测 2.线粒体基因突变： 3.肿瘤相关基因： 4.DNA重排形成融合基因： 三、基因多态性 1.基因定位和遗传病相关性分析 2.药物代谢酶与血药浓度 3.疾病诊断和遗传咨询 4.多基因病的研究 5.器官移植配型和个体识别 四、循环游离核酸 肿瘤、产前诊断 第三节 临床分子生物学检验发展与应用 感染性疾病的分子诊断：病原微生物（病毒、病原菌、 衣原体、螺旋体等） 遗传性疾病的分子诊断：血友病、血红蛋白病、产前婴 儿检查 肿瘤的分子诊断： 个体化医学： 1、临床应用 80年代以来，基因检测在许多国家已成为常规检验 项目，主要用于感染性和遗传性疾病等的诊断。 分子诊断技术在我国 针对感染性疾病的病原体的分子诊断，有严格的管理 -项目报批：卫生部批准 -实验室：通过验收，定期校验仪器与器材 -试剂：国家药监局批准 -工作人员：经过培训，持证上岗 -质量控制：室内质量控制，室间质量评价 针对遗传性疾病的分子诊断？！ 针对多基因（多因素）疾病的分子诊断？！ 2、存在的问题 ①假阳性和假阴性问题 ②重复性问题 ③检测结果可比性差，难于质控，使分子诊断 的标准化和监管体系问题已迫在眉睫 ④仪器设备要求苛刻、