第07章临床专用自动生化仪技术分析.ppt

第七章临床专用自动生化分析仪分析技术 广州医学院医学检验系 刘忠民 目 录 前言 浊度分析 通过检测溶液浊度,对物质含量进行分析的方法。临床上多用于特定蛋白的分析。 特定蛋白 在机体内具有某种生理功能，疾病状态时又有着特定的病理生理意义的蛋白质，临床上常被称为特定蛋白（special protein）。 （一）浊度分析的基础理论 1.胶体溶液 粒子对光具有反射、折射、散射和吸收等作用。 2.光透射理论 朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律： 3.光散射理论 雷莱（Rayleigh）公式： 该公式来自气溶胶悬浮微粒，用于溶液时需进行校正。 当使用高强度光源（如激光）时，液相悬浮颗粒与非偏振光源的散射作用公式为： 公式可见，散射光强度与颗粒的浓度和分子量有关。 雷莱公式与修正公式 雷莱公式 仅适合直径＜1／10入射光波长的小颗粒 Debye修正公式 适合于颗粒直径略小于入射光波长的溶液 Mie修正公式 适合于颗粒直径等于或大于入射光波长的溶液 4.免疫浊度分析 在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原-抗体免疫复合物颗粒，使反应液出现浊度； 当光线通过介质中的复合物颗粒时，可形成光的吸收、透射、散射和折射； 通过测量透射光或散射光信号强弱，从而推算出被测物的量。 （二）浊度分析的基本方法 浊度分析方法的分类 根据检测器的位置及其接收光信号的性质分： 透射免疫浊度法（turbidimetry immunoassay） 散射免疫浊度法（nephelometry immunoassay） 根据复合物形成速度和测定方式分： 终点浊度法 速率浊度法 根据浊度形成的原理分： 沉淀反应免疫浊度法：灵敏度低 胶乳凝集比浊（或粒子强化免疫浊度法）：灵敏度高 1.透射免疫浊度法 指在光源的光路0o角方向上测量透射光强度，并研究其与被检测溶液微粒浓度关系的方法。 2.散射免疫浊度法 指在光路的5o～90o角的方向上测量散射光强度，并研究其与被测溶液中微粒浓度关系的方法。 免疫浊度分析法测定光路图 1.终点散射浊度法 检测反应终点与起始点之间信号变化的方法为终点测定法。 2.速率散射浊度法 所谓速率即指在抗原抗体结合反应过程中，单位时间内两者结合成复合物的量。 速率散射浊度法是在抗原与抗体反应的最高峰测定其复合物形成的量，该峰值的高低与抗原的量成正比。 粒子强化免疫浊度法 为一种带载体的免疫浊度法，其敏感度较高。该方法选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集。 单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。 （一）浊度分析仪分类 1.分光光度仪 采用终点法作免疫浊度分析的测定仪。 2.自动生化分析仪 目前较流行的大型多通道自动生化分析仪多专门编有或可自编透射浊度分析程序。 3.散射浊度分析仪 应用较为普遍的有固定时间散射分析仪、速率散射分析仪和双光路自动免疫浊度分析仪。 （二）自动散射浊度分析仪的结构 主要由分析系统、计算机系统组成。 分析系统 用于加样、稀释、保温和测试等； 包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘、卡片阅读器以及软盘驱动器等； 计算机系统 用于输入病人数据、选择程序菜单、计算参考曲线和储存测试结果； 包括计算机主机、CRT显示屏和键盘等。 散射浊度分析仪光路示意图 常规保养 1.日保养 ①关机前冲洗管道，以防止管道阻塞。 ②开机前应检查注射器，防止漏液。 ③检查稀释液、缓冲液及抗体试剂中液体的体积。 ④检查废液桶中的废液是否已经装满。 ⑤在做标本之前必须对所有光路进行光路校正。 2.周保养 ①更换流动比色杯和小磁棒。 ②用纱布蘸 10%漂白溶液清洁探针的外部。 ③检查蠕动泵和钳制阀控制着管路中液体的流动情况。 常规保养 3.月保养 ①更换注射器插杆顶端； ②空气过滤网冲洗； ③疏通标本和抗体探针的内部。 4.半年保养 ①更换钳制阀上管道和泵周管道； ②给机械传动部分的螺丝上润滑油。 （一）抗原过剩校正 免疫浊度分析的基本要求： 始终保持反应体系中抗体适量过剩。 抗原过剩的检测方法： ①连续监测抗原抗体反应曲线，当抗原过剩时，反应曲线呈现异常。 ②反应体系中追加抗体，如果浊度继续增大则提示抗原过剩。 ③待测标本用两种稀释度测定，浓度高的样本浊度反而降低则提示抗原过剩。 （二）减少伪浊度 伪浊度： 在反应体系中，除待测抗原抗体免疫复合物产生的浊度外，其它可引起透射光或散射光发生变化的浊度都称为伪浊度。 减少产生伪浊度的方法： 1.标本：采用新鲜、合格标本。 2.检测体系：保持比色杯和稀释杯清洁。 3.试剂：使用合格的抗体试剂。 4.增浊剂浓度：严格控制增浊剂的浓度。