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PAGE \* MERGEFORMAT 17 高三生物第一讲基因工程 植物细胞克隆动物细胞克隆克隆的定义克隆技术生态工程基因工程一、 现代生物科技专题 植物细胞克隆 动物细胞克隆 克隆的定义 克隆技术 生态工程 基因工程 基因工程 一、基因工程的诞生理论和技术的发展催生了基因工程 （一）理论 证明DNA是遗传物质；DNA双螺旋结构的发现；DNA半保留复制的证明；遗传密码的破译和中心法则的提出 （二）技术 1967年，罗思和海林斯基发现细菌质粒的复制和转移作用 1970 年科学家在细菌中发现限制性核酸内切酶，之后发现连接酶、逆转录酶等 1972年首次成功构建体外重组DNA分子 1973年重组DNA在大肠杆菌体内成功表达标志基因工程诞生 1977年发明了DNA测序仪和合成仪 1980年第一例转基因动物(小鼠)问世 1988年PCR技术诞生 二、基因工程的原理与技术 （一）基因工程的概念 按照 意愿，通过 和 等技术，创造出符合 需要的 或 （二）基因工程的工具 3’5’5 3’ 5’ 5’ 3’ G T T A C A C T A A T G 3 3’ 5’ G A A T T C C T T A A G 5’ 3’ 存在的生物种类——主要存在于 中 特异性 多样性 DNA重组的基础 2.基因工程的针线—— 酶 作用：在两个DNA片段之间形成 ，完成基因的重组。 3.基因进入受体细胞的运载工具—— 作为该工具的条件 A. B. C. 一般使用的载体 ， 最常用的载体 其化学本质是 （三）基因工程的操作步骤 1.获取目的基因 （1）建立基因文库，从中获取目的基因 ①基因文库的构建 导入 导入 DNA连接酶 限制酶 载体 总DNA 基因组所有基因 重组DNA分子 受体细胞 所用的酶 优缺点 适用生物 真核生物一般不用此方法获取目的基因，原因是 ②建立cDNA文库，从中获取目的基因 （真核细胞） 逆转录酶 逆转录酶 总mRNA cDNA 双链DNA 所用的酶 获得目的基因的特点 比较基因组文库和cDNA文库 基因组文库 cDNA文库 文库大小 是否含有非编码区和内含子 基因的数目 （2）化学方法合成目的基因 已知蛋白质的氨基酸序列 已知蛋白质的氨基酸序列 mRNA的碱基序列 DNA碱基序列 目的基因 推测 推测 化学合成 (3)利用PCR技术获取目的基因（聚合酶链式反应） ① ① ② ② 引物 引物a 引物 引物b ③ ③ 体内DNA复制 PCR扩增 场所 原理 条件 模板 原料 酶 引物 其他 过程 结果 复制DNA分子，速度较慢 指数形式扩增 2.目的基因与运载体结合—— 相