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蛋白质提纯干实验
蛋白质提纯干实验?
一、?实验目的:?
1.?了解模拟免疫干实验的方法和意义,掌握用protein软件提纯蛋白质的方法?。?2.?进一步熟悉层析、热变性、盐析等常用生化分离方法的原理和应用。?二、?实验原理:?
“Protein”软件有36个任务,即36组待分离纯化的蛋白。任务要求利用软件提供的几种实验技术,提纯每一个目的蛋白,最终达到单向电泳一条带,双向电泳一个点,而且使用的人时和经费(根据提取步骤计算得到)不得超过一个特定值。在每个任务开始时,软件给出目的蛋白的一些性质,如热稳定的温度范围和pH稳定范围等,利用这些信息,可以使实验少走弯路。?
“Protein”提供的分离纯化方法有七种:①热变性;②硫铵沉淀;③排阻层析(凝胶色谱);④离子交换层析;⑤吸附层析;⑥聚焦层析;⑦制备电泳。?
在“Protein”所提供的各种分离纯化方法中,热变性法和盐析法是比较好的粗提方法,在提纯的早期使用效果较好。层析是各种方法中最强有力的方法,制备电泳虽然纯化倍数高,但是回收率低。在各种层析方法中,又以离子交换层析最为有效和易于使用,并且耗费的人时和经费也较少。排层层析和聚焦层析耗费较大,但在某些特定情况下,这两种方法是不可替代的。?
“Protein”提供了四种电泳方法:即,SDS、PAGE、等电聚焦电泳和双向电泳。这些电泳方法不但可以用以检测样品的纯度,而且也给出了样品的一些信息,如分子量、等电点等,这些信息对于后续提纯有重要的参考价值,等电聚焦电泳和PAGE还可以用于制备。?
本实验要求完成实验软件中三种酶的分离纯化。
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