电镜技术四技术总结.pptVIP

一般从样品的外观上我们可以分为固体样品和粉末样品两种。 ①?固体样品的固定固定用的导电介质分大概按分： 高倍观察（5万倍）低倍观察（5万倍） 液体导电胶 导电胶带固定方法如图所示 ②粉末样品的固定可以直接固定在导电胶带或者液体导电胶上，注意点：如果是导电胶带，揭下来的剥离纸一定要倒着放，撒完样品后在用剥离纸干净的面压一下，固定的才会牢； ?如果是液体导电胶，最好是用水溶性的，不容易和样品发生反应，撒样品的时间点控制在导电胶快干的时候撒，才能使样品达到半浸没状态。 也可以用分散法，见图 ③?截面样品制作如果是硅片或者是玻璃，需要用到玻璃刀，注意点：用玻璃刀划的时候要让开观察的面，也就是说可以上面和下面各划一下，然后再掰就可以了根据不同样品材质，有的时候是正面掰好，有的时候是从背面掰好 对于薄膜类的样品，可以用液氮粹断， 电镜细胞化学是将细胞化学和电镜技术相结合的一项技术，是光学显微镜组织化学基础上的延伸与发展。该技术是将特定反应产物形成电子散射力强的不溶性沉淀物，借助电镜做超微结构的原位分析。由于细胞内酶分布和细胞超微结构二者密切结合，从而为探讨细胞的生理和病理状态提供了科学依据。此法无需对酶进行提取和分离，就能获得组织或细胞内有关代谢的大量信息，因此能将超微结构与功能反应有机地结合起来。目前，用该技术检出的酶大约有80种，近40种可进行超微结构定位。酶的电镜细胞化学技术大致操作步骤为：化学固定或冷冻切片、温育、锇化、脱水、树脂包埋、超薄切片、电子染色、电镜观察等。　　 第三节 共焦显微术共焦显微术 所用的仪器通常称为共焦激光扫描显微镜，即应用共焦的原理，以激光为光源，用扫描的方式进行工作。八十年代以后，由于有了高强度照明的激光光源、高速扫描技术和高效率的计算机图像处理系统才使共焦显微术进入了实用阶段。　　 共焦显微术的基本原理是对样品的照明光源只聚焦于焦平面的一点，检测器也只检测来自这同一点的光(称为共焦)；扫描技术是将光点在样品的各点逐点扫描或按同样方式在整个样品的不同深度，逐层、逐点扫描；检测器将扫描信号输送到计算机图像处理系统，便可重建整个样品的清晰图像。用这种方法记录的图像数据系统与现代医学诊断用计算机断层(computerizedtomography,CT)所得的数据系统极为相似，也可看做是细胞的CT。　　 共焦显微术是非浸入性的无损断层扫描图像，因此能在活细胞上进行。图像处理可使样品的像进行三维重构，重现立体图像，还可从空间的任何角度观察其整个结构，并能将多片图像叠合而获得一个延伸焦点的图像。 第七节 X-ary能谱分析仪 临床电镜快速检测病毒技术微波辐射制样 微波辐射制样方法是将生物样品的固定、脱水、浸透、包埋、染色等操作均在微波炉中进行,予以一定“火力”和时间的微波辐射，从而加速制样过程。　　 (1)微波辐射制样技术的原理:　　微波是一种非电离辐射的电磁波，其波长在1mm至1m之间，用频率为2450MHz(兆赫兹)。生物样品中的一些双极分子，如H2O、有极性侧键的蛋白分子以及电荷不均一的其它任何分子，一旦暴露于电磁波的照射下，这些分子以180度的角度以每秒2450MHz的高速进行转动与震动，在短时间内组织内部便产生高热，从而加速固定、包埋、染色，以及免疫反应、组化反应等的时间和提高制备质量，利用家用微波炉即可在两小时内制备出高质量的包埋样品供电镜观察。图片的反差良好，精细度极高，染色沉淀很少。对包埋后的样品进行免疫金标记，亦可大大加速反应。通常利用在微波炉四周加水的方法来调节微波炉内的温度，以免炉温度过高破坏组织内的抗原性。　　 (2)微波辐射快速制样技术的基本程序：现以国产蚬华牌家用微波炉为例来介绍。该仪器的功率为550W，并设有P1～P10共10个火力段。　　 ①取材 取新鲜材料，按超薄切片常规法进行；　　 ②固定 将样品置于25％戊二醛中，放入微波炉，在P1火力段下辐射15秒钟作前固定，用磷酸缓冲液冲洗样品3次，再用1％锇酸液浸泡并放入微波炉中，于P1火力段下经15秒钟作后固定；　　 ③脱水 在室温下放置60秒钟，经磷酸缓冲液冲洗3次(每次3分钟)，用50～100％系列丙酮逐级脱水，每级脱水均在P1火力段下辐射1分钟左右；　　 ④浸透 先将样品放入环氧丙烷中，在室温下放置10分钟，然后依次投入环氧丙烷与环氧树脂1∶1和1∶2混合液中，在P1火力段下2分钟；然后将样品放入纯环氧树脂中，在P1火力段下3分钟；　　 ⑤包埋 将样品置于配制好的包埋液中，并于周边放一盛有300ml水的烧杯，在P1火力段下30分钟，而后再移去周边的烧杯，继续在P1火力段下辐射30分钟；