高二年级第二学期生物学科总第课时教案课题第二节分子生物学.doc

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高二年级第二学期生物学科总第课时教案课题第二节分子生物学

高二年级第二学期生物学科 总第 课时教案 课题: 第二节 分子生物学技术 pcr技术 使用时间: 主备人: 教学目标: 1、知识与技能: 1、了解PCR技术的基本操作2、理解PCR的原理3、讨论PCR的应用 2、过程与方法: 在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验过程中,应避免外源DNA污染,严格控制温度等反应条件 3、情感态度价值观: 通过对PCR实验的操作及结果分析,培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神 教学重点: PCR的原理和PCR的基本操作 教学难点: PCR的原理 教学方法: 启发式教学 教具使用: 多媒体课件 共案部分 个案部分 教学过程 教师主导活动 学生主体活动 课前: 完成本章知识的梳理,及导学案中的自检题。检查汇总。 学生完成本章知识的梳理,做导学案中的自检题。 课中: 对上节课存在问题进行点拨。 新授: 根据学生自学情况,引导学生分析主要的问题。强调以下几点。 1.PCR技术的原理是什么? 2.进行PCR扩增时,向离心管中加入的是什么物质? 3.简述PCR扩增的过程。 4.为什么在聚合酶链式反应中要使用DNA聚合酶? 5.简述“目的DNA片段的体外扩增”的过程。 疑难解析 1.PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93~C左右一定时问后,使模板DNA 链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板一引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性——退火——延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 2.PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种,即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。 3.引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA NI补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 学生对上节存在问题进行讨论。 学生自学基础知识。 学生根据导学案内容讨论并展示个人、小组成果。 思考: 课后: 布置课外作业及下一节预习提纲。(见导学案) 学生完成课外作业及下一节预习。 板书设计 教学札记 三、其他补充教学资料(各位教师根据各班教学特点选择补充资料,可另附纸) 1.基础知识 PCR技术扩增DNA的过程,与细胞内DNA复制过程类似: 1.1细胞内DNA复制条件分析: 条件 组分 作用 模板 DNA的两条单链 提供复制的模板 原料 四种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 酶 解旋酶 DNA聚合酶 打开DNA双螺旋 催化合成DNA子链 能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点 1.2细胞内DNA复制过程 (1)DNA结构: 核苷酸分子的结构与方向性: 由核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接形成核苷酸长链: DNA双螺旋结构的反向平行结构: (2)DNA的复制过程: 解 旋:解旋酶、ATP,DNA两条链打开,,形成两条DNA单链。 引物结合:在DNA单链3’端与DNA反向配对结合,确保引物3’端与DNA单链准确配对。 DNA聚合酶结合: 子链合成:DNA聚合酶从引物3’端开始,将配对的脱氧核苷酸连接起来。 后续加工:DNA聚合酶I将引物切去,并合成空缺处的DNA单链,再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来(半不连续合成。先导链,滞后链) 子链合成特点:不能从头合成;合成方向为“5’→3’合成”。 感悟生命的神秘:DNA聚合酶不但能够催化磷酸二酯键的形成,还具有校对功能。它在每引入一个核苷酸后都要复查一次,只有碱基配对无误后才能继续往下聚合,它不能从头合成。RNA聚合酶没有校对功能,因此RNA的合成不需要引物,而是从头合成的,它的错配可能性较大,在RNA引物完成功能后即被DNA聚合酶I删去,代之以高保真的DNA链。 [思考]D

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