精选课件Shimadzu_液相色谱基础.ppt

液相色谱基础 色谱起源 岛津高效液相色谱仪LC-10Avp系列 高效液相色谱分析过程 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。 分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。 色谱分离过程 高效液相色谱原理 色谱法：利用样品组分在两相间分配系数 不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的液体 固定相：静止不动的一相，化学键合型固 定相 高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。 HPLC 有以下特点： 高压-压力可达15~30MPa。 高速-流速为0.001~10.000 ml/min。 高效。在一根柱中同时分离成份可达100 种。 高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。荧光和电化学检测器可达0.1pg。 高效液相色谱法的分类 按分离机制不同分为 液固色谱法 键合相液相色谱法 正相色谱法 反相色谱法 离子交换色谱法 离子对色谱法 体积排阻色谱法 液相维护流程图 输液泵 送液方式： 恒流控制 恒压控制 VP系列：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵 Prominence：LC-20AD 、LC-20AT、 LC-20AB泵 D泵：并联微体积往复式泵 T泵：串联式往复泵 B泵：并联微体积往复式泵（2组） 等度洗脱和梯度洗脱 梯度洗脱 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。 优点：可提高分离度、缩短分析时间、降低最小检测量和提高分离精度 注意事项： 溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差 进样器 手动进样器使用须知 全量进样：进样体积至少为定量环的3倍以上。 半量进样：进样量应不大于定量环体积的50%。 一定要使用合规格的进样器，规格为外径0.028英寸，长2英寸的平头针。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。 检测器 紫外可见光检测器 停机扫描 二极管阵列检测器 电导检测器 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%) 广泛应用于离子色谱。主要用于检测水溶性无机和有机离子 电化学检测器 原理：测量电活性分子在工作电极表面氧化或还原反应时所产生电流变化的检测 优点： 1）灵敏度高 2）选择性好，只检测电活性物质 缺点： 1）不适用于梯度洗脱 2）对温度、压力变化敏感 蒸发光散射检测器 原理：柱流出物雾化 流动相蒸发 溶质粒子散射光强度 检测 HPLC 的图形结果－色谱图 液相色谱图相关术语（1） 液相色谱图相关术语（2） 液相色谱图相关术语（3） 液相色谱图相关术语（4） 色谱图 光谱图 吸光度 波长 时间 荧光检测器 优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、 色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系） 示差折光检测器 原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点：通用型检测器 缺点： 1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3）属于中等灵敏度的检测器 优点： 1、适用于没有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待测物 2、可以应用有强